| 致谢 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 专业词汇中英文对照表 | 第11-20页 |
| 第一章 绪论 | 第20-32页 |
| ·肿瘤微环境的研究现状 | 第20-22页 |
| ·肿瘤微环境的组成 | 第20-21页 |
| ·肿瘤微环境的特征 | 第21-22页 |
| ·肿瘤相关巨噬细胞(Tumor Associated Macrophages,TAMs) | 第22-25页 |
| ·TAMs的来源 | 第22-23页 |
| ·TAMs的功能研究 | 第23-25页 |
| ·TAMs与免疫抑制作用 | 第24页 |
| ·TAMs与血管生成过程 | 第24页 |
| ·TAMs与肿瘤生长、转移作用 | 第24-25页 |
| ·肿瘤微环境中exosome的研究现状 | 第25-30页 |
| ·Exosome的形成过程及形态特征 | 第25-26页 |
| ·Exosome的组成特点 | 第26-28页 |
| ·肿瘤微环境中exosome的功能研究 | 第28-30页 |
| ·巨噬细胞来源exosome的研究现状 | 第30页 |
| ·结语 | 第30-32页 |
| 第二章 小鼠巨噬细胞和肿瘤相关巨噬细胞的全细胞定量蛋白质组学研究 | 第32-60页 |
| ·引言 | 第32页 |
| ·材料与方法 | 第32-43页 |
| ·实验材料 | 第33-36页 |
| ·细胞系 | 第33页 |
| ·Real-time PCR引物 | 第33-34页 |
| ·主要试剂 | 第34页 |
| ·抗体 | 第34页 |
| ·其他 | 第34页 |
| ·主要仪器 | 第34-35页 |
| ·计算机分析软件 | 第35-36页 |
| ·实验方法 | 第36-43页 |
| ·TAMs细胞模型的建立 | 第36页 |
| ·细胞总RNA的提取 | 第36页 |
| ·Reverse transcription | 第36-37页 |
| ·实时定量PCR | 第37-38页 |
| ·蛋白质的提取 | 第38页 |
| ·蛋白质的浓度测定 | 第38页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第38页 |
| ·Western Blot | 第38-39页 |
| ·细胞免疫荧光和激光共聚焦 | 第39页 |
| ·细胞核的提取 | 第39-40页 |
| ·蛋白质的溶液内酶解消化 | 第40页 |
| ·银染检测消化效率 | 第40页 |
| ·iTRAQ标记 | 第40-41页 |
| ·高pH值反相(RP)-高效液相色谱(HPLC)分离混合肽段 | 第41页 |
| ·UtraFlex MALDI-TOF/TOF质谱检测 | 第41-42页 |
| ·LC-MS/MS分析 | 第42页 |
| ·质谱数据搜库匹配及筛选 | 第42-43页 |
| ·数据统计分析 | 第43页 |
| ·实验结果 | 第43-59页 |
| ·CT26培养基诱导TAMs细胞模型 | 第43-45页 |
| ·CT26培养基诱导TAMs形态变化 | 第43-44页 |
| ·CT26培养基诱导TAMs中炎症细胞因子表达水平变化 | 第44-45页 |
| ·Ana-1和TAMs细胞全蛋白消化效率检测 | 第45-46页 |
| ·Ana-1和TAMs的细胞全蛋白谱的定性结果分析 | 第46-47页 |
| ·Ana-1和TAMs的细胞全蛋白谱的定量结果分析 | 第47-48页 |
| ·Ana-1和TAMs胞内差异蛋白质的功能分析 | 第48-56页 |
| ·TAMs中GR通路的活化 | 第56-59页 |
| ·小结 | 第59-60页 |
| 第三章 小鼠巨噬细胞和肿瘤相关巨噬细胞的exosome及exosome-free的定量蛋白质组学研究 | 第60-90页 |
| ·引言 | 第60页 |
| ·材料与方法 | 第60-64页 |
| ·实验材料 | 第60-61页 |
| ·主要试剂 | 第60-61页 |
| ·抗体(部分同第二章) | 第61页 |
| ·其他试剂(部分同第二章) | 第61页 |
| ·主要仪器(部分同第二章) | 第61页 |
| ·实验方法(部分同第二章) | 第61-64页 |
| ·Exosome的提取 | 第61-62页 |
| ·Exosome直径的检测(透射电镜法) | 第62页 |
| ·Exosome直径及分布检测(Nanoparticle Tracking Analysis) | 第62页 |
| ·Exosome-free蛋白的制备 | 第62页 |
| ·蛋白质的提取 | 第62-63页 |
| ·iTRAQ标记 | 第63页 |
| ·高pH值反相(RP)-高效液相色谱(HPLC)分离混合肽段、UtraFlexMALDI-TOF/TOF质谱检测、LC-MS/MS分析、质谱数据搜索、数据统计分析 | 第63页 |
| ·20S蛋白酶体的检测 | 第63-64页 |
| ·2100 Bioanalyzer检测RNA组成 | 第64页 |
| ·实验结果 | 第64-89页 |
| ·Ana-1和TAMs的exosome提取及鉴定 | 第64-66页 |
| ·Ana-1和TAMs细胞分泌exosome及exosome-free消化效率检测 | 第66-67页 |
| ·MADLI-TOF/TOF对标记效率的检测以及应用RP-HPLC对肽段预分离 | 第67-69页 |
| ·Ana-1和TAMs的exosome及exosome-free蛋白谱的定性结果分析 | 第69-72页 |
| ·Ana-1和TAMs的exosome及exosome-free蛋白质组定量结果分析 | 第72-79页 |
| ·Ana-1及TAMs来源的exosome差异蛋白的功能分析 | 第79-81页 |
| ·Ana-1及TAMs来源的exosome差异蛋白的验证 | 第81-82页 |
| ·Ana-1及TAMs来源的exosome差异蛋白的功能验证 | 第82-84页 |
| ·Ana-1和TAMs-exosome中RNA组成及丰度的检测 | 第82-83页 |
| ·Ana-1和TAMs的exosome中20S蛋白酶体活性的检测 | 第83-84页 |
| ·Ana-1和TAMs的exosome-free差异蛋白的功能分析 | 第84-85页 |
| ·Ana-1及TAMs来源的exosome、exosome-free及全细胞组分差异蛋白的关联分析 | 第85-89页 |
| ·小结 | 第89-90页 |
| 第四章 小鼠巨噬细胞和肿瘤相关巨噬细胞的exosome及exosome-free的定性整合分析 | 第90-102页 |
| ·引言 | 第90页 |
| ·实验材料与方法(部分同第三章) | 第90-91页 |
| ·计算机软件(同第三章) | 第90页 |
| ·实验方法(同第三章) | 第90-91页 |
| ·质谱数据搜库匹配及筛选 | 第90-91页 |
| ·iBAQ intensity归一化方法 | 第91页 |
| ·实验结果 | 第91-101页 |
| ·小鼠巨噬细胞系分泌的exosome及exosome-free分泌蛋白偏好性分析 | 第91-97页 |
| ·基于iBAQ intensity对小鼠巨噬细胞分泌的exosome及exosome-free蛋白的分类 | 第91-94页 |
| ·Exosome及exosome-free分泌蛋白偏好性及其功能分析 | 第94-96页 |
| ·Exosome及exosome-free组分差异蛋白的相对丰度分析 | 第96-97页 |
| ·小鼠巨噬细胞exosome蛋白组成的细胞特异性分析 | 第97-101页 |
| ·Exosome核心组成蛋白的相对丰度及功能分析 | 第97-100页 |
| ·不同细胞来源exosome的功能特性分析 | 第100-101页 |
| ·小结 | 第101-102页 |
| 第五章 讨论 | 第102-106页 |
| ·TAMs功能表型与GR信号通路激活的关系 | 第102-103页 |
| ·TAMs exosome的强酶解活性的讨论 | 第103页 |
| ·TAMs功能在其分泌的exosome中的体现 | 第103-104页 |
| ·小鼠巨噬细胞来源exosome的特殊RNA组成的讨论 | 第104页 |
| ·巨噬细胞的不同分泌形式特性的揭示 | 第104-106页 |
| 基本结论 | 第106-108页 |
| 参考文献 | 第108-114页 |
| 作者简介及在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第114页 |
