| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-22页 |
| ·萜类化合物合成途径 | 第12-13页 |
| ·萜类化合物种类及功能 | 第13-14页 |
| ·植物中萜类化合物相关酶研究进展 | 第14-19页 |
| ·HMGR | 第15-16页 |
| ·DXS | 第16-17页 |
| ·DXR | 第17-19页 |
| ·与烟草香气相关的萜类化合物研究进展 | 第19-20页 |
| ·CRISPR/Cas9技术在植物中的研究进展 | 第20-22页 |
| 第二章 引言 | 第22-24页 |
| ·研究背景及意义 | 第22页 |
| ·研究内容 | 第22-23页 |
| ·技术路线 | 第23-24页 |
| 第三章 烟草NtDXS/NtDXR/NtHMGR1/NtHMGR2基因克隆及生物信息学分析 | 第24-42页 |
| ·材料与仪器 | 第24-25页 |
| ·实验材料 | 第24页 |
| ·主要试剂 | 第24页 |
| ·主要仪器设备 | 第24页 |
| ·溶液配方 | 第24-25页 |
| ·实验方法与步骤 | 第25-28页 |
| ·植物培养 | 第25页 |
| ·总RNA的提取 | 第25-26页 |
| ·核酸质量检测 | 第26页 |
| ·cDNA第一链合成 | 第26页 |
| ·目的基因克隆 | 第26-28页 |
| ·NtDXS/NtDXR/NtHMGR1/NtHMGR2基因的生物信息学分析 | 第28页 |
| ·结果及分析 | 第28-40页 |
| ·烟草叶片总RNA提取 | 第28页 |
| ·烟草NtDXS/NtDXR/NtHMGR1/NtHMGR2编码区序列的克隆 | 第28-29页 |
| ·目的基因生物信息学分析 | 第29-40页 |
| ·讨论 | 第40-42页 |
| 第四章 烟草NtDXS/NtDXR/NtHMGR1/NtHMGR2表达模式分析及NtDXR亚细胞定位 | 第42-50页 |
| ·实验材料 | 第42-43页 |
| ·植物材料 | 第42页 |
| ·载体 | 第42页 |
| ·实验试剂 | 第42页 |
| ·实验设备 | 第42页 |
| ·溶液配方 | 第42-43页 |
| ·实验方法及步骤 | 第43-46页 |
| ·植物培养及取材 | 第43页 |
| ·组织表达分析 | 第43-44页 |
| ·NtDXR的亚细胞定位 | 第44-46页 |
| ·实验结果及分析 | 第46-48页 |
| ·NtDXS/NtDXR/NtHMGR1/NtHMGR2组织表达模式分析 | 第46页 |
| ·NtDXR亚细胞定位载体构建 | 第46-47页 |
| ·NtDXR亚细胞定位 | 第47-48页 |
| ·讨论 | 第48-50页 |
| 第五章 烟草NtDXR和NtHMGR1过表达转基因植株和敲除转基因植株的获得 | 第50-64页 |
| ·实验材料 | 第50-51页 |
| ·植物材料 | 第50页 |
| ·载体及菌珠 | 第50页 |
| ·实验设备 | 第50页 |
| ·实验试剂及试剂盒 | 第50页 |
| ·溶液配方 | 第50-51页 |
| ·实验方法及步骤 | 第51-55页 |
| ·目的基因过表达载体构建 | 第51页 |
| ·CRISPR/Cas9敲除载体构建 | 第51-52页 |
| ·农杆菌化学感受的制备 | 第52页 |
| ·重组表达载体转化农杆菌LBA4404 | 第52-53页 |
| ·阳性农杆菌转化子筛选 | 第53页 |
| ·烟草叶片遗传转化 | 第53-54页 |
| ·转基因植株的筛选 | 第54-55页 |
| ·结果及分析 | 第55-62页 |
| ·烟草NtDXR和NtHMGR1基因植物过表达载体构建 | 第55-57页 |
| ·烟草NtDXR和NtHMGR1基因植物敲除载体构建 | 第57-58页 |
| ·农杆菌阳性转化子筛选 | 第58-59页 |
| ·超表达转基因株系筛选 | 第59-61页 |
| ·敲除转基因株系筛选 | 第61-62页 |
| ·讨论 | 第62-64页 |
| 第六章 转基因烟草中萜类化合物含量变化及MVA、MEP代谢通路关系初探 | 第64-76页 |
| ·实验材料 | 第64-65页 |
| ·植物材料 | 第64页 |
| ·实验设备 | 第64页 |
| ·实验试剂 | 第64-65页 |
| ·实验方法及步骤 | 第65页 |
| ·色素提取及测定 | 第65页 |
| ·萜类代谢物质提取及测定 | 第65页 |
| ·甾醇物质提取及测定 | 第65页 |
| ·结果与分析 | 第65-73页 |
| ·转基因植株叶片色素含量测定 | 第65-68页 |
| ·转基因植株叶片甾醇含量测定 | 第68-69页 |
| ·转基因植株叶片萜类含量测定 | 第69-71页 |
| ·MVA、MEP代谢通路关系初探 | 第71-73页 |
| ·讨论 | 第73-76页 |
| 第七章 结论与展望 | 第76-78页 |
| ·主要结论 | 第76-77页 |
| ·后续研究工作 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-88页 |
| 致谢 | 第88-90页 |
| 硕士期间发表论文及参加课题 | 第90页 |
| 发表论文 | 第90页 |
| 参加课题 | 第90页 |
