| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-15页 |
| 英文缩略表 | 第15-16页 |
| 第一章 引言 | 第16-23页 |
| ·猪细小病毒的研究进展 | 第16-19页 |
| ·PPV的病原学 | 第16-17页 |
| ·基因组结构 | 第17-18页 |
| ·基因组的复制与转录 | 第18页 |
| ·PPV基因组编码蛋白和功能 | 第18-19页 |
| ·转铁蛋白受体的研究进展 | 第19-21页 |
| ·TfR的结构 | 第19-20页 |
| ·TfR的功能 | 第20-21页 |
| ·病毒的细胞受体 | 第21-22页 |
| ·细胞表面病毒受体的研究方法 | 第21页 |
| ·TfR作为病毒细胞受体的研究进展 | 第21-22页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第22-23页 |
| 第二章 荧光定量PCR方法的建立及应用 | 第23-34页 |
| ·材料 | 第23页 |
| ·细胞、毒株及主要试剂 | 第23页 |
| ·主要仪器设备 | 第23页 |
| ·方法 | 第23-26页 |
| ·引物设计 | 第23-24页 |
| ·PPV在ST细胞上的增殖实验 | 第24页 |
| ·病毒DNA的提取 | 第24页 |
| ·病毒及细胞总RNA的提取及反转录 | 第24-25页 |
| ·荧光定量PCR标准曲线的建立 | 第25页 |
| ·敏感性分析 | 第25-26页 |
| ·特异性分析 | 第26页 |
| ·重复性分析 | 第26页 |
| ·PPV增殖曲线的建立 | 第26页 |
| ·荧光定量PCR方法检测PPV感染ST细胞后PPV增殖情况及TfRmRNA转录水平的变化 | 第26页 |
| ·统计分析 | 第26页 |
| ·结果 | 第26-32页 |
| ·荧光定量PCR的引物特异性鉴定 | 第26-27页 |
| ·荧光定量标准曲线的建立 | 第27-30页 |
| ·敏感性分析结果 | 第30页 |
| ·特异性分析结果 | 第30-31页 |
| ·重复性分析结果 | 第31页 |
| ·PPV的增殖曲线 | 第31-32页 |
| ·PPV感染后的TfR的转录实相 | 第32页 |
| ·讨论 | 第32-34页 |
| 第三章 TfR和VP2的真核表达 | 第34-45页 |
| ·材料 | 第34-35页 |
| ·细胞、质粒及主要试剂 | 第34页 |
| ·主要仪器 | 第34-35页 |
| ·方法 | 第35-40页 |
| ·引物的设计 | 第35页 |
| ·真核表达质粒的构建 | 第35-38页 |
| ·HEK293T细胞的复苏 | 第38页 |
| ·HEK293T细胞的培养 | 第38页 |
| ·细胞的转染 | 第38页 |
| ·Western blot检测 | 第38-39页 |
| ·激光共聚焦实验 | 第39页 |
| ·免疫共沉淀实验 | 第39-40页 |
| ·结果 | 第40-44页 |
| ·目的基因的扩增结果 | 第40页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第40-41页 |
| ·Western blot检测重组质粒的表达 | 第41-42页 |
| ·用激光共聚焦实验检测VP2蛋白和TfR蛋白的共定位 | 第42页 |
| ·用免疫共沉淀实验检测VP2蛋白和TfR蛋白的相互作用 | 第42-44页 |
| ·讨论 | 第44-45页 |
| 第四章 稳定表达猪TfR的HEK293细胞系的建立 | 第45-57页 |
| ·材料 | 第45-46页 |
| ·细胞、质粒和菌种 | 第45页 |
| ·主要试剂 | 第45页 |
| ·主要实验仪器 | 第45-46页 |
| ·方法 | 第46-51页 |
| ·引物的设计 | 第46页 |
| ·pLVX-TfR-His重组质粒的构建与鉴定 | 第46-48页 |
| ·TfR在HEK293T细胞中的瞬时表达及western blot鉴定 | 第48页 |
| ·重组慢病毒包装及病毒滴度的测定 | 第48-49页 |
| ·慢病毒转导和细胞筛选 | 第49-50页 |
| ·筛选细胞的鉴定 | 第50页 |
| ·病毒感染实验 | 第50-51页 |
| ·结果 | 第51-56页 |
| ·重组慢病毒载体的构建 | 第51页 |
| ·HEK293T细胞的绿色荧光检测及western blot鉴定 | 第51-52页 |
| ·重组慢病毒包装及病毒滴度的测定 | 第52页 |
| ·HEK293-TfR细胞及HEK293-ZsGreen细胞的筛选 | 第52-53页 |
| ·筛选细胞的鉴定 | 第53-54页 |
| ·病毒感染试验 | 第54-56页 |
| ·讨论 | 第56-57页 |
| 第五章 全文结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 作者简历 | 第66页 |
