| 论文创新点 | 第1-9页 |
| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 缩略语表 | 第13-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-48页 |
| 一、朊病毒疾病的研究 | 第14-31页 |
| 1.朊病毒疾病的发现及病因假说 | 第14-15页 |
| 2.朊病毒分了生物学性质 | 第15-22页 |
| 3.朊病毒感染途径及机理研究 | 第22-26页 |
| 4.朊病毒疾病的诊断 | 第26-27页 |
| 5.朊病毒的种间障碍和遗传多样性 | 第27-30页 |
| 6.展望 | 第30-31页 |
| 二、朊蛋白构像变化研究 | 第31-42页 |
| 1.蛋白质折叠研究进展 | 第31-35页 |
| 2.朊蛋白构像转变研究 | 第35-42页 |
| 3.展望 | 第42页 |
| 三、朊蛋白PrP的互作蛋白KCTD1及其家族研究进展 | 第42-48页 |
| 1.BTB域和KCTD家庭成员之间的同源性 | 第43-44页 |
| 2.作为介导分子的KCTD蛋白质 | 第44-45页 |
| 3.KCTD家族蛋白的疾病相关性 | 第45-47页 |
| 4.展望 | 第47-48页 |
| 第二章 牛、鼠、兔朊蛋白的表达纯化、抗体制备及理化性质比较 | 第48-101页 |
| 前言 | 第48-49页 |
| 一、实验试剂、耗材 | 第49-54页 |
| 1.实验仪器 | 第49-50页 |
| 2.实验材料 | 第50-51页 |
| 3.实验试剂 | 第51-54页 |
| 二、试验方法 | 第54-66页 |
| 1.重组MoPrP基因克隆构建 | 第54-57页 |
| 2.鼠朊蛋白基因与表达载体(pET30a)构建重组克隆 | 第57-58页 |
| 3.重组兔朊蛋白基因(RabPrP)克隆构建 | 第58-60页 |
| 4.兔朊蛋白基因与表达载体(pET30a)构建重组克隆 | 第60页 |
| 5.朊蛋白BoPrP、MoPrP、RabPrP的表达 | 第60-61页 |
| 6.牛朊蛋白BoPrP的鉴定 | 第61页 |
| 7.牛朊蛋白BoPrP的大量表达及纯化 | 第61-63页 |
| 8.蛋白的浓度测定 | 第63页 |
| 9.牛朊蛋白BoPrP多克隆抗体的制备 | 第63-64页 |
| 10.用多克隆抗体进行免疫实验来检测牛羊脑组织 | 第64页 |
| 11.牛朊蛋白圆二色光谱测定 | 第64-65页 |
| 12.牛朊蛋白ANS外源荧光实验 | 第65页 |
| 13.牛朊蛋白ThT荧光激发实验 | 第65页 |
| 14.牛朊蛋白的蛋白酶K消化实验 | 第65-66页 |
| 三、实验结果 | 第66-91页 |
| 1.牛朊蛋白的表达纯化及理化分析 | 第66-76页 |
| 2.鼠朊蛋白克隆构建及表达纯化、理化分析 | 第76-84页 |
| 3.兔朊蛋白的克隆构建及表达纯化、理化分析 | 第84-91页 |
| 四、三种动物朊蛋白的理化性质比较分析 | 第91-96页 |
| 1.荧光检测三种PrP蛋白在酸诱导下的去折叠情况 | 第91页 |
| 2.三种朊蛋白的酸变性CD分析 | 第91-93页 |
| 3.三种朊蛋白在尿素诱导下的去折叠情况 | 第93页 |
| 4.三种朊蛋白的热稳定性分析 | 第93-94页 |
| 5.三种肌蛋白的ThT外源荧光检测比较 | 第94页 |
| 6.三种朊蛋白抗蛋白酶K消化的比较 | 第94-96页 |
| 五、讨论与展望 | 第96-101页 |
| 第三章 朊蛋白互作蛋白KCTD1的表达纯化及理化性质初步分析 | 第101-115页 |
| 前言 | 第101页 |
| 一、实验试剂、耗材 | 第101-102页 |
| 1.组织中总RNA的提取 | 第101页 |
| 2.逆转录合成cDNA第一链 | 第101-102页 |
| 3.PCR反应 | 第102页 |
| 4.蛋白质的纯化 | 第102页 |
| 二、实验方法 | 第102-107页 |
| 1.组织中总RNA的提取 | 第102-103页 |
| 2.测量RNA的浓度和纯度 | 第103页 |
| 3.逆转录合成cDNA第一链 | 第103-104页 |
| 4.PCR反应 | 第104页 |
| 5.酶切反应 | 第104页 |
| 6.pET30-KCTD1构建 | 第104-105页 |
| 7.KCTD1蛋白的预表达检测 | 第105页 |
| 8.KCTD1蛋白的大量表达与纯化 | 第105-106页 |
| 9.蛋白定量 | 第106页 |
| 10.Western blot检测KCTD1蛋白 | 第106-107页 |
| 11.分子筛检测KCTD1蛋白的纯度 | 第107页 |
| 12.MALDI-TOF质谱分析KCTD1蛋白 | 第107页 |
| 13.圆二色光谱法分析KCTD1蛋白二级结构 | 第107页 |
| 三、实验结果与分析 | 第107-113页 |
| 1.pET30a-KCTD1质粒的构建 | 第108页 |
| 2.KCTD1蛋白的可溶性表达的条件的选择 | 第108-110页 |
| 3.分子筛分析KCTD1蛋白 | 第110-111页 |
| 4.MALDI-TOF质谱分析KCTD1蛋白 | 第111-112页 |
| 5.CD分析KCTD1蛋白结构 | 第112-113页 |
| 四、讨论与展望 | 第113-115页 |
| 参考文献 | 第115-127页 |
| 研究总结 | 第127-128页 |
| 一、牛、鼠、兔朊蛋白理化性质比较分析及兔抗朊病毒感染的分子机制初步分析 | 第127页 |
| 二、朊蛋白PrP的互作蛋白KCTD1的表达纯化及理化性质分析 | 第127-128页 |
| 攻博期间发表的科研成果目录 | 第128-129页 |
| 致谢 | 第129页 |
