| 创新点 | 第1-8页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-34页 |
| 1 选择性剪接研究进展 | 第12-16页 |
| 2 hnRNP研究现状 | 第16-20页 |
| 3 PKM选择性剪接对代谢的影响与瓦氏效应 | 第20-26页 |
| 4 miRNA与心脏的重要关系 | 第26-31页 |
| 5 miR-490-3p的研究现状与心脏的相关性 | 第31-32页 |
| 6 本论文研究的目的与意义 | 第32-34页 |
| 第二章 hnRNPA基因的进化分析 | 第34-64页 |
| 1.引言 | 第34-35页 |
| 2.材料与方法 | 第35-44页 |
| ·各物种目的基因序列的获取 | 第35页 |
| ·各物种基因序列的比较和进化分析 | 第35页 |
| ·转录因子结合位点分析 | 第35页 |
| ·表观遗传信息分析 | 第35页 |
| ·用于多样性分析的家猪/野猪样品的收集 | 第35页 |
| ·家猪/野猪样品DNA的提取和纯化 | 第35-36页 |
| ·家猪/野猪差异候选基因启动子区域的PCR扩增 | 第36-37页 |
| ·候选基因启动子区域PCR产物的回收与测序 | 第37-38页 |
| ·测序结果的分析与比对 | 第38-39页 |
| ·家猪/野猪TCTP内含了区段荧光报告载体的构建及活性分析 | 第39-40页 |
| ·染色质免疫共沉淀 | 第40-41页 |
| ·hnRNPA1家猪/野猪启动子区域DNA的扩增与纯化 | 第41-42页 |
| ·hnRNPA1家猪/野猪启动子荧光素酶报告载体构建 | 第42页 |
| ·hnRNPA1截短启动子荧光素酶报告载体构建 | 第42-43页 |
| ·hnRNPA1基因家猪/野猪启动子活性分析与比较 | 第43-44页 |
| 3.实验结果 | 第44-56页 |
| ·hnRNP基因家族进化分析 | 第44页 |
| ·hnRNPA1/A2与CBX5/CBX3共线性关系分析 | 第44-46页 |
| ·以家猪/野猪为进化模型对hnRNPA1等基因启动子的比较分析 | 第46-55页 |
| ·hnRNPA1基因家族表观遗传信息分析 | 第55-56页 |
| 4.讨论 | 第56-62页 |
| ·hnRNPA1/A2/A3基因蛋白序列高度保守 | 第56页 |
| ·hnRNPA1/A2基因与CBX5/3基因的共线性进化 | 第56-57页 |
| ·hnRNPA1基因启动子区高度保守 | 第57-62页 |
| 5.小结 | 第62-64页 |
| 第三章 miR-490-3p对hnRNPA1/2/3的调控及在心肌损伤中的作用 | 第64-99页 |
| 1.引言 | 第64-66页 |
| 2.材料与方法 | 第66-74页 |
| ·hnRNP A1/A2/A3基因3’-UTR调控位点预测与同源性分析 | 第66页 |
| ·DNA与miRNA mimics的合成 | 第66页 |
| ·载体构建 | 第66-67页 |
| ·细胞转染、慢病毒包装与感染 | 第67-68页 |
| ·双荧光素酶法验证miRNA对靶UTR序列的调控作用 | 第68页 |
| ·小鼠各组织、细胞和外周血中RNA样品的制备 | 第68-69页 |
| ·mRNA及miRNA的反转录、半定量与定量分析 | 第69页 |
| ·蛋白样品的制备与Westernblot杂交实验 | 第69-72页 |
| ·H9C2细胞生长速度测定实验 | 第72页 |
| ·PCR产物酶切法鉴定大鼠PKM1/PKM2的表达 | 第72页 |
| ·小鼠急性心肌损伤模型的制作与取血 | 第72-73页 |
| ·小鼠外周血miRNA的定量分析 | 第73页 |
| ·小鼠心肌组织切片、HE染色 | 第73页 |
| ·小鼠心脏组织miRNA和相关基因的定量分析 | 第73-74页 |
| 3.实验结果 | 第74-87页 |
| ·hnRNP A1/A2/A3基因3’-UTR调控位点分析 | 第74-75页 |
| ·miRNA对hnRNP A1/A2/A3基因UTR的调控分析 | 第75-77页 |
| ·miR-490-3p对细胞hnRNP A1基因表达的影响 | 第77-78页 |
| ·miR-490-3p与hnRNP A1在不同组织的相关性分析 | 第78-80页 |
| ·miR-490-3p与CHRM2在不同组织内的相关性分析 | 第80页 |
| ·miR-490-3p对大鼠心肌细胞H9C2的hnRNPA1的调控和对PKM选择性剪接模式的影响 | 第80-83页 |
| ·心脏组织中PKM1转录本的含量检测 | 第83页 |
| ·miR-490-3p对大鼠心肌细胞H9C2生长性质的影响 | 第83-85页 |
| ·miR-490-3p在心肌损伤动物外周血中的变化 | 第85-86页 |
| ·心肌损伤模型中hnRNPA1的表达变化 | 第86-87页 |
| 4.讨论 | 第87-96页 |
| ·hnRNP A1/A2/A3基因具有共同的保守性miRNA调控靶位点 | 第87-88页 |
| ·miR-490-3p通过3’-UTR下调hnRNP A1/A2/A3的表达 | 第88-89页 |
| ·miR-490-3p与hnRNP A1/A2/A3在不同组织中的表达负相关 | 第89-90页 |
| ·miR-490-3p通过下调hnRNP A1/A2/A3影响PKM1/2选择性剪接 | 第90-94页 |
| ·miR-490-3p抑制大鼠心肌细胞H9C2生长 | 第94-95页 |
| ·miR-490-3p在心肌损伤小鼠外周血中的变化 | 第95页 |
| ·miR-490-3p及其效应基因在心肌损伤中的变化 | 第95-96页 |
| 5.小结 | 第96-99页 |
| 中英文对照表 | 第99-100页 |
| 参考文献 | 第100-112页 |
| 在读期间发表论文 | 第112-113页 |
| 致谢 | 第113页 |
