| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-10页 |
| 目录 | 第10-15页 |
| 缩写词表(Abbreviations) | 第15-16页 |
| 1 绪论 | 第16-34页 |
| ·木薯生物学特性 | 第16-17页 |
| ·我国木薯种植区域分布 | 第17-19页 |
| ·转基因技术在木薯上的应用 | 第19-22页 |
| ·抗病毒 | 第19页 |
| ·抗虫 | 第19-20页 |
| ·降低生氰化合物含量 | 第20-21页 |
| ·提高蛋白质含量 | 第21页 |
| ·抗除草剂 | 第21页 |
| ·控制淀粉含量及组成 | 第21-22页 |
| ·木薯转基因潜力 | 第22-23页 |
| ·木薯抗逆境能力 | 第22页 |
| ·木薯采后衰变 | 第22-23页 |
| ·植物耐寒遗传改良研究进展 | 第23-28页 |
| ·与膜稳定性相关的抗寒分子育种 | 第23-24页 |
| ·抗氧化酶活性相关的抗寒分子育种 | 第24页 |
| ·与抗冻蛋白表达相关的抗寒分子育种 | 第24-25页 |
| ·与低温信号转录相关的抗寒分子育种 | 第25-26页 |
| ·与渗透调节相关的抗寒分子育种 | 第26-27页 |
| ·与植物激素调节相关的抗寒分子育种 | 第27-28页 |
| ·耐寒转基因木薯研究的目的意义及研究背景 | 第28-30页 |
| ·本研究的主要内容与技术路线 | 第30-34页 |
| ·研究所用的基因简介 | 第30-31页 |
| ·实验所用的表达载体简介(由我们实验室构建) | 第31-32页 |
| ·主要内容 | 第32-33页 |
| ·研究的技术路线 | 第33-34页 |
| 2 木薯遗传转化受体系统的建立 | 第34-52页 |
| ·实验材料 | 第34页 |
| ·植物材料 | 第34页 |
| ·生化试剂 | 第34页 |
| ·主要仪器和设备 | 第34页 |
| ·培养基及添加成分 | 第34页 |
| ·实验方法 | 第34-36页 |
| ·木薯无菌苗体系的建立 | 第34-35页 |
| ·木薯无菌苗的继代增殖 | 第35页 |
| ·木薯体胚的诱导及循环培养 | 第35-36页 |
| ·CaCl2对木薯体胚的影响 | 第36页 |
| ·木薯体胚子叶的成熟及再生培养 | 第36页 |
| ·结果分析 | 第36-47页 |
| ·木薯外植体消毒方法的确定 | 第36-38页 |
| ·不同浓度6-BA对木薯单芽茎段培养的影响 | 第38-40页 |
| ·不同激素对木薯体胚诱导的影响 | 第40-41页 |
| ·不同CaCl_2浓度对木薯体胚的影响 | 第41-43页 |
| ·培养时间对木薯成熟胚子叶再生能力的影响 | 第43-45页 |
| ·木薯体胚循环发生及植株再生途径 | 第45-47页 |
| ·结论与讨论 | 第47-51页 |
| ·木薯高效再生体系的建立 | 第47-48页 |
| ·木薯无菌苗的继代及扩繁 | 第48-49页 |
| ·木薯体胚的发生 | 第49页 |
| ·CaCl_2对长期保持体胚活力的影响 | 第49-50页 |
| ·木薯植株再生 | 第50-51页 |
| 小结 | 第51-52页 |
| 3 表达载体的验证及木薯的遗传转化 | 第52-72页 |
| ·实验材料 | 第52-54页 |
| ·植物材料 | 第52页 |
| ·根癌农杆菌菌株及载体 | 第52-53页 |
| ·试剂的配制 | 第53-54页 |
| ·主要仪器和设备 | 第54页 |
| ·培养基添加成分 | 第54页 |
| ·实验方法 | 第54-58页 |
| ·根癌农杆菌的活化及工程菌液的制备 | 第54-55页 |
| ·农杆菌质粒的提取(碱裂解法) | 第55页 |
| ·大肠杆菌的活化及感受态制备 | 第55-56页 |
| ·农杆菌质粒转化大肠杆菌感受态 | 第56页 |
| ·大肠杆菌质粒提取及酶切鉴定 | 第56-57页 |
| ·农杆菌转化体胚子叶及筛选再生 | 第57-58页 |
| ·结果与分析 | 第58-69页 |
| ·植物表达载体转化大肠杆菌酶切鉴定 | 第58-59页 |
| ·木薯转化及植株再生 | 第59页 |
| ·共培养时间对木薯转化的影响 | 第59页 |
| ·再生植株的生根筛选 | 第59-69页 |
| ·结论与讨论 | 第69-70页 |
| ·木薯遗传转化方法及影响转化率的因素 | 第69-70页 |
| 小结 | 第70-72页 |
| 4 木薯转基因植株的检测 | 第72-96页 |
| ·实验材料 | 第72-73页 |
| ·植物材料 | 第72页 |
| ·试剂药品 | 第72页 |
| ·转基因木薯的PCR引物设计 | 第72页 |
| ·主要仪器设备 | 第72-73页 |
| ·实验方法 | 第73-82页 |
| ·质粒DNA的提取(碱法) | 第73页 |
| ·木薯基因组DNA的提取 | 第73-74页 |
| ·木薯总RNA小量提取(Super RNAzol法) | 第74-75页 |
| ·PCR检测 | 第75-77页 |
| ·RT-PCR检测 | 第77-79页 |
| ·PCR-Southern杂交检测 | 第79-82页 |
| ·结果与分析 | 第82-92页 |
| ·木薯总DNA的提取 | 第82-83页 |
| ·转pVKH-35S-AtGolS2-pA基因植株的PCR检测 | 第83-84页 |
| ·转pVKH-35S-AtGolS2-ipt-pA基因植株的PCR检测 | 第84-86页 |
| ·转pVKH-35S-CBF3-pA基因植株的PCR检测 | 第86-87页 |
| ·转pCA-CP-CBF3-pA基因植株的PCR检测 | 第87-88页 |
| ·转pVKH-35S-AtGolS3-pA基因植株的PCR检测 | 第88页 |
| ·RT-PCR检测 | 第88-89页 |
| ·PCR-southern杂交检测 | 第89-92页 |
| ·结论与讨论 | 第92-94页 |
| ·木薯转基因植株的检测与鉴定 | 第92-94页 |
| 小结 | 第94-96页 |
| 5 木薯试管苗炼苗移栽 | 第96-102页 |
| ·实验材料 | 第96页 |
| ·植物材料 | 第96页 |
| ·实验方法 | 第96页 |
| ·基质的选择 | 第96页 |
| ·瓶苗炼苗方式 | 第96页 |
| ·移栽季节选择 | 第96页 |
| ·组培苗状态 | 第96页 |
| ·瓶苗移栽后的养护管理 | 第96页 |
| ·结果与分析 | 第96-100页 |
| ·不同基质对移栽苗成活的影响 | 第96-97页 |
| ·炼苗方式对移栽成活的影响 | 第97页 |
| ·不同移栽时期对移栽成活的影响 | 第97页 |
| ·组培苗状态对移栽成活的影响 | 第97-99页 |
| ·春季修剪对移栽苗生长状况的影响 | 第99-100页 |
| ·结论与讨论 | 第100-101页 |
| 小结 | 第101-102页 |
| 6 转基因植株耐寒性分析 | 第102-113页 |
| ·实验材料 | 第102页 |
| ·植物材料 | 第102页 |
| ·试剂配制 | 第102页 |
| ·主要仪器设备 | 第102页 |
| ·实验方法 | 第102-103页 |
| ·低温处理试管苗 | 第102页 |
| ·低温处理盆栽苗 | 第102页 |
| ·酶液提取 | 第102页 |
| ·低温处理木薯SOD活性的测定 | 第102-103页 |
| ·丙二醛(MDA)的测定 | 第103页 |
| ·结果与分析 | 第103-110页 |
| ·低温处理后转基因木薯试管苗状况 | 第103-106页 |
| ·木薯转pVKH-35S-AtGolS2-pA基因植株的耐寒性 | 第106-107页 |
| ·木薯转pVKH-35S-AtGolS2-ipt-pA基因植株的耐寒性 | 第107-108页 |
| ·木薯转pCACP-CBF3-pA基因植株的耐寒性 | 第108-110页 |
| ·结论与讨论 | 第110-112页 |
| ·转基因木薯抗寒性及其检测 | 第110-111页 |
| ·AtGolS2和ipt的转录融合转化木薯 | 第111页 |
| ·CBF3和AtGolS3转基因木薯 | 第111-112页 |
| 小结 | 第112-113页 |
| 7 结论与研究展望 | 第113-116页 |
| ·结论 | 第113-115页 |
| ·研究展望 | 第115-116页 |
| 参考文献 | 第116-131页 |
| 作者简历 | 第131-133页 |
| 致谢 | 第133页 |
