| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 缩略语 | 第9-10页 |
| 目录 | 第10-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-21页 |
| 1 昆虫滞育的研究进展 | 第13-17页 |
| ·昆虫滞育 | 第13页 |
| ·外界环境与昆虫滞育 | 第13-14页 |
| ·昆虫滞育的调控 | 第14-17页 |
| 2 柞蚕滞育和滞育关联蛋白 | 第17-18页 |
| 3 TIME-EA4 与家蚕卵滞育 | 第18-21页 |
| ·家蚕 TIME-EA4 的研究 | 第18-19页 |
| ·PIN 的研究 | 第19页 |
| ·TIME-EA4 计时机制的阐述 | 第19-21页 |
| 第二章 实验方案设计 | 第21-23页 |
| 1 研究目的与意义 | 第21-22页 |
| 2 实验内容 | 第22页 |
| 3 实验流程图 | 第22-23页 |
| 第三章 生物信息学分析 | 第23-29页 |
| 1 序列和生物信息学分析工具 | 第23页 |
| ·序列 | 第23页 |
| ·生物信息学工具 | 第23页 |
| 2 结果 | 第23-27页 |
| ·Ap-dap3 的基因序列 | 第23-24页 |
| ·AP-DAP3 蛋白的疏水性分析 | 第24-25页 |
| ·AP-DAP3 蛋白的跨膜区分析 | 第25页 |
| ·AP-DAP3 蛋白的信号肽分析 | 第25-26页 |
| ·AP-DAP3 与 SOD 家族同源性比对 | 第26-27页 |
| ·AP-DAP3 蛋白三级结构预测及其与 TIME-EA4 的比对 | 第27页 |
| 3 讨论 | 第27-29页 |
| 第四章 AP-DAP3 基因的原核表达纯化与抗体制备 | 第29-45页 |
| 1 材料和试剂 | 第29-32页 |
| ·材料 | 第29页 |
| ·试剂 | 第29页 |
| ·试剂配制 | 第29-32页 |
| 2 方法 | 第32-40页 |
| ·柞蚕组织总 RNA 的提取和第一链 cDNA 的合成 | 第32-33页 |
| ·重组质粒的构建 | 第33页 |
| ·Ap-dap3 基因的克隆 | 第33-36页 |
| ·融合蛋白的表达与纯化 | 第36-38页 |
| ·BCA 法测定蛋白的浓度 | 第38页 |
| ·DAP3 多克隆抗体的制备 | 第38-40页 |
| 3 结果 | 第40-44页 |
| ·PCR 扩增目的基因 | 第40-41页 |
| ·重组质粒 pET-28a-Ap-dap3 的 PCR 和双酶切鉴定 | 第41-42页 |
| ·重组质粒在大肠杆菌中的诱导表达与纯化 | 第42页 |
| ·Western blot 进行抗体特异性鉴定 | 第42-43页 |
| ·多克隆抗体的效价检测 | 第43-44页 |
| 4 讨论 | 第44-45页 |
| 第五章 柞蚕 AP-DAP3 基因的表达谱分析 | 第45-58页 |
| 1 材料与试剂 | 第45-46页 |
| ·材料 | 第45页 |
| ·试剂 | 第45页 |
| ·试剂配制 | 第45-46页 |
| 2 方法 | 第46-48页 |
| ·柞蚕各时期及五龄幼蚕各组织总 RNA 的提取 | 第46页 |
| ·DNase I 消化基因组 DNA | 第46页 |
| ·反转录生成第一链 cDNA | 第46页 |
| ·荧光定量 PCR 引物设计及荧光定量 PCR | 第46-47页 |
| ·荧光定量 PCR | 第47页 |
| ·定量 PCR 数据分析 | 第47-48页 |
| ·柞蚕各时期及各组织蛋白提取 | 第48页 |
| ·AP-DAP3 在柞蚕各发育时期的表达分析 | 第48页 |
| ·AP-DAP3 在五龄幼虫各组织中的表达分析 | 第48页 |
| 3 结果 | 第48-56页 |
| ·柞蚕滞育蛹发育时期 dap3-mRNA 水平的变化 | 第48-50页 |
| ·柞蚕不同发育时期 dap3-mRNA 水平的变化 | 第50-52页 |
| ·柞蚕发育过程中 AP-DAP3 蛋白表达量的变化 | 第52-53页 |
| ·五龄幼虫各组织中 mRNA 量的比较 | 第53-55页 |
| ·五龄幼虫各组织中 AP-DAP3 蛋白表达水平分析 | 第55-56页 |
| 4 讨论 | 第56-58页 |
| 第六章 AP-DAP3 活性鉴定和功能初探 | 第58-67页 |
| 1 材料和试剂 | 第58页 |
| ·材料 | 第58页 |
| ·试剂 | 第58页 |
| 2 方法 | 第58-60页 |
| ·重组蛋白 SOD 活性测定 | 第58-59页 |
| ·柞蚕蛹氧化应激模型建立 | 第59页 |
| ·DAP3 转录水平变化分析 | 第59页 |
| ·DAP3 表达水平变化分析 | 第59-60页 |
| ·体内 SOD 活性变化 | 第60页 |
| 3 结果 | 第60-65页 |
| ·融合蛋白 HIS-DAP3 生物学活性检测 | 第60-61页 |
| ·氧化应激条件下 dap3-mRNA 水平变化 | 第61-63页 |
| ·氧化应激条件下 AP-DAP3 蛋白表达量的比较 | 第63-64页 |
| ·氧化应激条件下蚕蛹总蛋白 SOD 活性差异检测 | 第64-65页 |
| 4 讨论 | 第65-67页 |
| 结论 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
