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禾谷镰刀菌Homeobox转录因子Htf1缺失突变体差异表达蛋白鉴定及其功能分析

摘要第1-9页
Abstract第9-10页
1 引言第10-19页
   ·禾谷镰刀菌研究概况第10-15页
     ·禾谷镰刀菌形态学特征第10页
     ·禾谷镰刀菌引起的病害及病害循环第10-11页
     ·禾谷镰刀菌产生毒素的研究进展第11-15页
       ·禾谷镰刀菌产生的毒素及其影响第11-13页
       ·禾谷镰刀菌产毒过程中分子生物学方面的研究第13-15页
   ·Homeobox基因研究概况第15-18页
     ·Homeobox基因的发现第15页
     ·Homeobox基因的分类第15-16页
     ·Homeobox基因的结构特征第16-17页
     ·Homeobox基因在不同物种中的功能第17-18页
       ·动物中的Homeobox基因第17页
       ·植物中的Homeobox基因第17-18页
       ·菌物中的Homeobox基因第18页
   ·本研究的目的和意义第18-19页
2 材料与方法第19-30页
   ·试验使用的菌株、实验试剂和培养基等材料第19-21页
     ·供试菌株第19页
     ·致病性鉴定材料第19页
     ·培养基第19页
     ·抗生素第19页
     ·用于双向电泳的生化试剂第19-21页
     ·用于基因敲除的生化试剂第21页
   ·实验方法第21-30页
     ·样品的收集,总蛋白的提取(TCA/丙酮法)及定量检测(Bradford法)第21-23页
       ·样品的收集第21页
       ·总蛋白的提取第21-22页
       ·总蛋白的裂解第22页
       ·总蛋白的定量第22-23页
     ·总蛋白双向电泳第23-26页
       ·第一向 等电聚焦(IEF)电泳第23-24页
       ·管胶的平衡第24页
       ·第二 向SDS-PAGE电泳第24-25页
       ·二向胶的染色(G250考染)第25页
       ·差异点的确定以及蛋白点的挖取第25-26页
     ·Htf1相关基因的功能分类第26页
     ·Htf1相关基因的敲除第26-29页
       ·禾谷镰刀菌基因组DNA的提取第26页
       ·运用PCR扩增A、B片段和HY、YG片段第26-27页
       ·SOE-PCR扩增长片段AH、HB第27页
       ·PCR产物的胶回收第27-28页
       ·禾谷镰刀菌原生质体制备第28页
       ·禾谷镰刀菌原生质体的转化第28-29页
     ·Htf1相关基因缺失突变体的表型观察第29-30页
       ·生长速率测定第29页
       ·产孢量的测定第29页
       ·植物致病性测定(小麦麦穗接种)第29-30页
3 结果与分析第30-40页
   ·敲除突变体的蛋白组学分析第30-32页
   ·用MALDI-TOF-TOF MS鉴定出差异蛋白第32-36页
   ·禾谷镰刀菌Htf1p相关基因敲除突变体的筛选与鉴定第36页
   ·Htf1p相关基因缺失突变体对禾谷镰刀菌营养生长的影响第36-37页
   ·Htf1p相关基因缺失突变体对禾谷镰刀菌致病性的影响第37-39页
   ·Htf1p相关基因缺失突变体对产孢量的影响第39-40页
4 全文总结讨论及后续研究第40-45页
附录1 本研究中所采用的引物序列及其用途第45-50页
附录2 本研究中双向电泳的其他重复第50-52页
附录3 差异蛋白在野生型PH-1和△FgHtf1中的蛋白表达水平第52-53页
参考文献第53-61页
致谢第61页

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