| 缩略词表(Abbreviations) | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 1 前言 | 第11-19页 |
| ·植物纤维素和纤维素合酶 | 第11-13页 |
| ·高等植物纤维素结构 | 第11页 |
| ·高等植物纤维素合酶 | 第11-12页 |
| ·纤维素合酶复合体的组成 | 第12-13页 |
| ·植物纤维素合酶活性及调控因子 | 第13-15页 |
| ·纤维素合酶的不稳定性和纤维素体外合成的复杂性 | 第13-14页 |
| ·纤维素体外合成进展 | 第14页 |
| ·纤维素合成的调控 | 第14-15页 |
| ·棉花纤维素合酶研究进展 | 第15-18页 |
| ·棉花纤维的发育过程 | 第15-16页 |
| ·棉花纤维素合酶基因 | 第16-17页 |
| ·棉花纤维素合酶活性鉴定 | 第17-18页 |
| ·果胶甲酯酶的功能 | 第18页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第18-19页 |
| 2 材料和方法 | 第19-41页 |
| ·材料 | 第19页 |
| ·菌株和载体 | 第19-21页 |
| ·棉花CesAs和PME的EST序列 | 第21-22页 |
| ·棉花基因的克隆 | 第22-32页 |
| ·RNA提取 | 第22-23页 |
| ·DNA提取 | 第23-24页 |
| ·质粒提取 | 第24页 |
| ·PCR扩增、产物回收和载体连接 | 第24-26页 |
| ·E.coli感受态细胞制备 | 第26页 |
| ·外源片段的转化及检测 | 第26-27页 |
| ·快速扩增cDNA末端(RACE) | 第27-32页 |
| ·载体构建及农杆菌介导的遗传转化 | 第32-34页 |
| ·GhPME1和GhPEL超表达载体的构建 | 第32页 |
| ·GhPME1和Ghβ-1,3-glucanase的RNAi载体构建 | 第32-33页 |
| ·花粉管通道法遗传转化棉花 | 第33-34页 |
| ·棉花纤维素合酶活性鉴定 | 第34-38页 |
| ·棉纤维膜蛋白的提取 | 第34-35页 |
| ·纤维素体外合成 | 第35-36页 |
| ·免疫共沉淀(Co-IP) | 第36页 |
| ·SDS-PAGE | 第36-38页 |
| ·Western blotting | 第38页 |
| ·目的蛋白纯化 | 第38-41页 |
| ·原核表达蛋白的纯化 | 第38-40页 |
| ·抗体纯化 | 第40-41页 |
| 3 结果与分析 | 第41-65页 |
| ·GhCesA6、GhCesA7和GhPME1全长cDNA克隆 | 第41-46页 |
| ·序列比对和引物设计 | 第41-42页 |
| ·GhCesA6全长cDNA克隆 | 第42-43页 |
| ·GhCesA7全长cDNA克隆 | 第43-45页 |
| ·GhPMEl基因克隆 | 第45-46页 |
| ·GhCESAs和GhPME1生物信息学分析 | 第46-51页 |
| ·GhCESAs和GhPME1的保守结构域分析 | 第46-48页 |
| ·植物CESAs和PMEs的聚类分析 | 第48-50页 |
| ·GhCESAs和GhPME1跨膜结构分析 | 第50-51页 |
| ·GhCESAs和GhPME1分子量和等电点分析 | 第51页 |
| ·GhCesA6、GhCesA7和GhPME1 mRNA表达模式 | 第51-52页 |
| ·GhPME1抗原制备 | 第52-55页 |
| ·GhPME1抗原表位分析 | 第52-53页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第53页 |
| ·诱导表达 | 第53-54页 |
| ·抗原纯化 | 第54-55页 |
| ·转基因载体的构建和遗传转化 | 第55-58页 |
| ·GhPME1和GhPEL超表达载体构建 | 第55-56页 |
| ·GhPME1和Gβ-1,3-glucanase RNAi载体构建 | 第56-57页 |
| ·农杆菌介导的遗传转化 | 第57-58页 |
| ·棉花纤维素合酶活性鉴定 | 第58-65页 |
| ·表面活性剂的选择 | 第58页 |
| ·提取方法对酶活性的影响 | 第58-59页 |
| ·纤维素酶对酶活性的影响 | 第59-61页 |
| ·磷酸化水平对酶活性的调控 | 第61-62页 |
| ·氧化还原状态对酶活性的调控 | 第62-63页 |
| ·不同发育时期的酶活性分析 | 第63-65页 |
| 4 讨论 | 第65-71页 |
| ·棉纤维膜蛋白的提取方法 | 第65-66页 |
| ·表面活性剂对原生质膜的裂解 | 第66-67页 |
| ·氧化还原状态对酶活性的影响 | 第67页 |
| ·体外合成产物的分离鉴定 | 第67-68页 |
| ·总结 | 第68-69页 |
| ·展望 | 第69-71页 |
| 参考文献 | 第71-76页 |
| 附录 | 第76-95页 |
| 附录Ⅰ. 试剂配方 | 第76-77页 |
| 附表Ⅱ. 引物信息 | 第77-78页 |
| 附录Ⅲ. 克隆序列 | 第78-94页 |
| 附录Ⅳ. 用于聚类分析的氨基酸序列 | 第94-95页 |
| 致谢 | 第95页 |
