| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-13页 |
| 第1章 文献综述 | 第13-22页 |
| ·历史回顾 | 第13页 |
| ·猪繁殖和呼吸综合征病毒病原学研究 | 第13-15页 |
| ·猪繁殖和呼吸综合征病毒的分类 | 第13-14页 |
| ·PRRSV的理化特性 | 第14页 |
| ·PRRSV的抗原性 | 第14-15页 |
| ·PRRSV的体外培养特性 | 第15页 |
| ·PRRSV的致病机理 | 第15页 |
| ·PRRSV分子生物学研究进展 | 第15-22页 |
| ·PRRSV基因组结构与功能 | 第15-16页 |
| ·PRRSV编码的蛋白及功能 | 第16-20页 |
| ·PRRSV基因组变异 | 第20页 |
| ·PRRSV毒力变异 | 第20页 |
| ·PRRSV的抗原性变异 | 第20-22页 |
| 第2章 研究目的与意义 | 第22-23页 |
| 第3章 高致病性PRRSV WUH3株适应细胞连续传代 | 第23-33页 |
| ·试验材料 | 第23-24页 |
| ·病料与细胞 | 第23页 |
| ·试剂及溶液配制 | 第23-24页 |
| ·试验方法 | 第24-28页 |
| ·病料采集与处理 | 第24页 |
| ·病毒的分离 | 第24-25页 |
| ·病毒的增值与传代 | 第25页 |
| ·病毒的纯化 | 第25页 |
| ·TCID_(50)的测定 | 第25页 |
| ·分离病毒的间接免疫荧光鉴定 | 第25-26页 |
| ·PRRSV基因组RNA的提取 | 第26页 |
| ·本实验所用的引物及扩增条件 | 第26-28页 |
| ·PCR产物的电泳检测 | 第28页 |
| ·结果与分析 | 第28-31页 |
| ·PRRSV病毒的分离 | 第28-29页 |
| ·间接免疫荧光试验(IFA) | 第29页 |
| ·病毒的RT-PCR检测 | 第29-30页 |
| ·细胞培养病毒液TCIDso的测定结果 | 第30-31页 |
| ·讨论 | 第31-32页 |
| ·PRRSV的细胞培养 | 第31页 |
| ·PRRSV体外反复传代致弱 | 第31-32页 |
| ·小结 | 第32-33页 |
| 第4章 高致病性PRRSV WUH3株不同代次病毒基因遗传变异研究 | 第33-70页 |
| ·试验材料 | 第33-35页 |
| ·菌株与细胞 | 第33页 |
| ·载体与质粒 | 第33-34页 |
| ·工具酶及主要试剂 | 第34页 |
| ·主要缓冲液与相关试剂及其配制 | 第34-35页 |
| ·实验方法 | 第35-37页 |
| ·PRRSV基因组RNA的提取和PCR产物电泳检测 | 第35页 |
| ·用DNA快速回收试剂盒回收纯化酶切产物DNA或PCR产物 | 第35页 |
| ·外源DNA片段与载体的连接反应 | 第35-36页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法) | 第36页 |
| ·连接产物的转化 | 第36页 |
| ·质粒的制备与鉴定 | 第36-37页 |
| ·重组质粒(阳性质粒)的鉴定 | 第37页 |
| ·重组子测序 | 第37页 |
| ·结果与分析 | 第37-66页 |
| ·全基因组扩增与克隆 | 第37页 |
| ·全基因组序列拼接与分析 | 第37-41页 |
| ·5’UTR核苷酸序列分析 | 第41-42页 |
| ·3’UTR核苷酸序列分析 | 第42页 |
| ·ORF1a编码的氨基酸变异分析 | 第42-50页 |
| ·ORF1b编码的氨基酸变异分析 | 第50-53页 |
| ·ORF2编码的氨基酸变异分析 | 第53-54页 |
| ·ORF3编码的氨基酸变异分析 | 第54-58页 |
| ·ORF4编码的氨基酸变异分析 | 第58-62页 |
| ·ORF5编码的氨基酸变异分析 | 第62页 |
| ·ORF6编码的氨基酸变异分析 | 第62-64页 |
| ·毒力相关氨基酸的推测与变异分析 | 第64页 |
| ·PRRSV WUH3株与其他强毒株的传代过程比较与分析 | 第64-66页 |
| ·讨论 | 第66-69页 |
| ·PRRSV WUH3株5'UTR及3'UTR的变异 | 第66-67页 |
| ·PRRSV WUH3株非结构蛋白氨基酸的变异 | 第67-68页 |
| ·PRRSV WUH3株结构蛋白氨基酸的变异 | 第68-69页 |
| ·PRRSV WUH3株全基因组中毒力相关位点的变异 | 第69页 |
| ·小结 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
