| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-13页 |
| 英文缩略表 | 第13-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-24页 |
| ·猪繁殖与呼吸综合征研究进展 | 第14-21页 |
| ·病毒分类和理化性质 | 第14-15页 |
| ·病毒基因组结构 | 第15页 |
| ·病毒结构蛋白及其功能 | 第15-17页 |
| ·病毒的生物学特性 | 第17-18页 |
| ·HP-PRRSV | 第18页 |
| ·病毒感染与免疫 | 第18-19页 |
| ·PRRSV 疫苗研究进展 | 第19-21页 |
| ·甲病毒复制子疫苗研究进展 | 第21-23页 |
| ·概念 | 第21-22页 |
| ·甲病毒复制子原理及特点 | 第22页 |
| ·复制子疫苗引起细胞凋亡的机理 | 第22-23页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第23-24页 |
| 第二章 PRRSV FZ06A 毒株 GP3、GP5 和 M 蛋白的截短表达及其抗体的制备 | 第24-45页 |
| 摘要 | 第24页 |
| ·实验材料 | 第24-27页 |
| ·菌体、细胞和病毒 | 第24页 |
| ·试剂及耗材 | 第24-25页 |
| ·实验试剂及配制方法 | 第25-27页 |
| ·主要仪器设备 | 第27页 |
| ·实验动物 | 第27页 |
| ·实验方法 | 第27-34页 |
| ·引物设计 | 第27-28页 |
| ·PRRSV FZ06A 病毒 RNA 的提取 | 第28页 |
| ·RT-PCR 扩增 GP3、GP5 和 M 蛋白基因 | 第28-29页 |
| ·目的基因序列生物学初步分析 | 第29页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第29-31页 |
| ·阳性质粒的筛选与鉴定 | 第31-32页 |
| ·转化至表达菌株 | 第32页 |
| ·PRRSV GP3、GP5 和 M 蛋白的诱导表达和可溶性分析 | 第32页 |
| ·Western blotting 鉴定重组蛋白 | 第32-33页 |
| ·m3JD、m5、MJD 蛋白的纯化 | 第33页 |
| ·GP5 蛋白单抗腹水的制备与纯化 | 第33-34页 |
| ·M 蛋白多抗的制备与纯化 | 第34页 |
| ·实验结果与分析 | 第34-43页 |
| ·RT-PCR 扩增目的基因基因片段 | 第34-35页 |
| ·目的基因序列分析 | 第35页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第35-38页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第38-39页 |
| ·Western blotting 鉴定结果 | 第39-40页 |
| ·蛋白纯化结果 | 第40-42页 |
| ·GP5 腹水制备及纯化 | 第42-43页 |
| ·M 蛋白多抗制备及纯化 | 第43页 |
| ·讨论 | 第43-45页 |
| 第三章 基于甲病毒复制子的 PRRS DNA 疫苗的构建及体外表达特性研究 | 第45-68页 |
| 摘要 | 第45页 |
| ·实验材料 | 第45-46页 |
| ·菌体、细胞和病毒 | 第45页 |
| ·试剂及耗材 | 第45页 |
| ·实验试剂及配制方法 | 第45-46页 |
| ·主要仪器设备 | 第46页 |
| ·实验方法 | 第46-57页 |
| ·引物设计 | 第46-47页 |
| ·目的基因的初步修饰 | 第47-50页 |
| ·VP22 基因与目的基因的连接 | 第50-51页 |
| ·VPm5 与 VPm6 基因的连接 | 第51-52页 |
| ·含修饰后目的基因的质粒的构建 | 第52-53页 |
| ·含增强型绿色荧光蛋白（EGFP）的自杀性复制子质粒的构建 | 第53-54页 |
| ·大量提取构建的自杀性复制子质粒 | 第54-55页 |
| ·杀性质粒最佳转染剂量及蛋白检测时间的确定 | 第55页 |
| ·自杀性复制子质粒转染 BHK-21 细胞 | 第55页 |
| ·转染细胞中目的基因 mRNA 的检测 | 第55-56页 |
| ·Wstern blotting 检测转染细胞中目的蛋白 | 第56-57页 |
| ·转染后细胞凋亡检测 | 第57页 |
| ·实验结果与分析 | 第57-66页 |
| ·基因修饰 | 第57-58页 |
| ·添加 Kozak 序列 | 第58-59页 |
| ·连接 VP22 基因 | 第59-60页 |
| ·VPm5 与 VP6 基因的连接 | 第60页 |
| ·含修饰后基因的复制子质粒的构建 | 第60-62页 |
| ·pSCA- EGFP 的构建 | 第62-63页 |
| ·最佳转染剂量和最佳检测时间的确定 | 第63-64页 |
| ·转染细胞中目的基因 mRNA 的检测 | 第64-65页 |
| ·IFA 检测转染细胞中蛋白表达水平 | 第65页 |
| ·Western blotting 检测转染细胞中蛋白表达水平 | 第65-66页 |
| ·转染后细胞凋亡检测 | 第66页 |
| ·讨论 | 第66-68页 |
| 第四章 基于甲病毒复制子的 PRRSV DNA 疫苗在小鼠体内诱导的免疫应答 | 第68-76页 |
| 摘要 | 第68页 |
| ·实验材料 | 第68-69页 |
| ·质粒和试剂 | 第68页 |
| ·实验动物 | 第68页 |
| ·试剂及配制方法 | 第68-69页 |
| ·主要仪器设备 | 第69页 |
| ·实验方法 | 第69-71页 |
| ·实验动物的选择和分组 | 第69页 |
| ·复制子质粒的提取和定量 | 第69页 |
| ·动物免疫前处理 | 第69页 |
| ·动物免疫程序 | 第69-70页 |
| ·免疫小鼠 T 淋巴细胞增殖实验 | 第70页 |
| ·免疫小鼠 IFN-γ水平监测 | 第70页 |
| ·免疫小鼠 IL-4 水平监测 | 第70页 |
| ·免疫小鼠特异性抗体水平监测 | 第70页 |
| ·免疫小鼠中和性抗体水平监测 | 第70-71页 |
| ·实验结果 | 第71-74页 |
| ·复制子质粒的提取和定量 | 第71页 |
| ·免疫小鼠 T 淋巴细胞增殖实验 | 第71-72页 |
| ·免疫小鼠 IFN-γ水平监测 | 第72页 |
| ·免疫小鼠 IL-4 水平监测 | 第72-73页 |
| ·免疫小鼠特异性抗体水平监测 | 第73-74页 |
| ·免疫小鼠中和性抗体水平监测 | 第74页 |
| ·讨论 | 第74-76页 |
| 第五章 全文总结 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-85页 |
| 致谢 | 第85-86页 |
| 作者简历 | 第86页 |
