致谢 | 第1-9页 |
摘要 | 第9-11页 |
文献综述 | 第11-24页 |
1 禽流感概述 | 第11页 |
2 H9 亚型禽流感的流行情况 | 第11-12页 |
·国内流行情况 | 第11-12页 |
·国外流行情况 | 第12页 |
3 禽流感病原学研究进展 | 第12-15页 |
·禽流感病毒分类地位及形态特征 | 第12-13页 |
·禽流感病毒理化特性及培养特性 | 第13页 |
·禽流感病毒宿主特异性和致病性 | 第13-14页 |
·禽流感病毒的感染复制机制 | 第14-15页 |
4 禽流感病毒分子生物学研究 | 第15-24页 |
·禽流感病毒基因组结构特征及转录复制过程 | 第15-16页 |
·禽流感病毒基因组及编码蛋白的结构和功能 | 第16-21页 |
·HA 基因 | 第16-17页 |
·NA 基因 | 第17-18页 |
·NP 基因 | 第18页 |
·聚合酶基因 | 第18-20页 |
·M 基因 | 第20页 |
·NS 基因 | 第20-21页 |
·禽流感病毒的遗传变异 | 第21-24页 |
·抗原性变异 | 第21-22页 |
·抗原漂移 | 第21-22页 |
·抗原转变 | 第22页 |
·致病性变异 | 第22-24页 |
引言 | 第24-25页 |
试验一 H9 亚型禽流感病毒的分离与鉴定 | 第25-35页 |
1 材料和方法 | 第25-29页 |
·材料 | 第25-26页 |
·主要仪器设备 | 第25页 |
·主要试剂 | 第25页 |
·试验动物 | 第25页 |
·病料来源 | 第25-26页 |
·试验方法 | 第26-29页 |
·病料样品的处理 | 第26-27页 |
·病毒的分离培养及纯化 | 第27页 |
·血凝试验(HA)及血凝抑制试验(HI) | 第27页 |
·中和试验 | 第27页 |
·RT-PCR 检测 | 第27-28页 |
·RNA 的提取步骤如下 | 第27页 |
·cDNA 的合成 | 第27-28页 |
·RT-PCR 扩增 | 第28页 |
·1 %琼脂糖凝胶电泳 | 第28页 |
·鸡胚半数感染量(EID50)的测定 | 第28页 |
·理化试验 | 第28-29页 |
·乙醚敏感试验 | 第28页 |
·氯仿敏感性试验 | 第28-29页 |
·耐酸性试验 | 第29页 |
·最小致死剂量致鸡胚死亡的平均时间(MDT)的测定 | 第29页 |
·1 日龄鸡脑内致病指数(ICPI) 测定 | 第29页 |
2 结果与分析 | 第29-34页 |
·病毒的分离结果 | 第29-30页 |
·LH01 等 4 个分离株 RT-PCR 结果 | 第30页 |
·LH01 等 4 个分离株鸡胚半数感染量(EID50)的测定结果 | 第30-31页 |
·LH01 等 4 个分离株理化试验结果 | 第31-32页 |
·LH01 等 4 个分离株最小致死剂量致鸡胚死亡的平均时间(MDT)测定结果 | 第32页 |
·LH01 等 4 个分离株对 1 日龄鸡脑内致病指数(ICPI) 测定结果 | 第32-34页 |
3 结论与讨论 | 第34-35页 |
试验二 H9 亚型禽流感病毒河南分离株全基因组的克隆 与序列分析 | 第35-58页 |
1 材料与方法 | 第35-41页 |
·材料 | 第35-36页 |
·毒株 | 第35页 |
·主要仪器 | 第35页 |
·主要试剂及试剂盒 | 第35页 |
·质粒与菌种 | 第35页 |
·试剂的配制 | 第35-36页 |
·琼脂糖电泳试剂 | 第35-36页 |
·大肠杆菌转化用溶液 | 第36页 |
·试验方法 | 第36-41页 |
·病毒RNA 的提取 | 第36-37页 |
·全基因的RT-PCR扩增 | 第37-38页 |
·cDNA 第一链合成 | 第37页 |
·PCR扩增 | 第37-38页 |
·1 %琼脂糖凝胶电泳 | 第38页 |
·4 株河南分离毒株全基因克隆及鉴定 | 第38-40页 |
·RT-PCR 产物的纯化 | 第38页 |
·PCR产物的连接 | 第38-39页 |
·连接产物的转化 | 第39页 |
·重组克隆的筛选 | 第39页 |
·重组质粒的提取 | 第39-40页 |
·重组质粒的酶切鉴定 | 第40页 |
·4 株 H9 亚型禽流感病毒全基因组核苷酸序列测定及序列分析 | 第40-41页 |
·4 株H9 亚型禽流感病毒全基因系统进化树分析 | 第41页 |
2 结果与分析 | 第41-56页 |
·4 株河南分离毒株8 个基因片段的RT-PCR 扩增结果 | 第41-42页 |
·4株河南分离毒株8个基因片段PCR产物纯化结果 | 第42页 |
·重组质粒的酶切鉴定及测序鉴定 | 第42-43页 |
·全基因组的测序及序列分析 | 第43-51页 |
·HA 基因分析 | 第43-45页 |
·NA 基因分析 | 第45-46页 |
·PB2 基因分析 | 第46-48页 |
·PB1 基因分析 | 第48-49页 |
·PA 基因分析 | 第49-51页 |
·系统进化树分析 | 第51-56页 |
3 结论与讨论 | 第56-58页 |
全文总结 | 第58-59页 |
参考文献 | 第59-68页 |
Abstract | 第68-70页 |
附录 | 第70-83页 |