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河南低致病性禽流感病毒(H9亚型)分离鉴定及生物学特性研究

致谢第1-9页
摘要第9-11页
文献综述第11-24页
 1 禽流感概述第11页
 2 H9 亚型禽流感的流行情况第11-12页
   ·国内流行情况第11-12页
   ·国外流行情况第12页
 3 禽流感病原学研究进展第12-15页
   ·禽流感病毒分类地位及形态特征第12-13页
   ·禽流感病毒理化特性及培养特性第13页
   ·禽流感病毒宿主特异性和致病性第13-14页
   ·禽流感病毒的感染复制机制第14-15页
 4 禽流感病毒分子生物学研究第15-24页
   ·禽流感病毒基因组结构特征及转录复制过程第15-16页
   ·禽流感病毒基因组及编码蛋白的结构和功能第16-21页
     ·HA 基因第16-17页
     ·NA 基因第17-18页
     ·NP 基因第18页
     ·聚合酶基因第18-20页
     ·M 基因第20页
     ·NS 基因第20-21页
   ·禽流感病毒的遗传变异第21-24页
     ·抗原性变异第21-22页
       ·抗原漂移第21-22页
       ·抗原转变第22页
     ·致病性变异第22-24页
引言第24-25页
试验一 H9 亚型禽流感病毒的分离与鉴定第25-35页
 1 材料和方法第25-29页
   ·材料第25-26页
     ·主要仪器设备第25页
     ·主要试剂第25页
     ·试验动物第25页
     ·病料来源第25-26页
   ·试验方法第26-29页
     ·病料样品的处理第26-27页
     ·病毒的分离培养及纯化第27页
     ·血凝试验(HA)及血凝抑制试验(HI)第27页
     ·中和试验第27页
     ·RT-PCR 检测第27-28页
       ·RNA 的提取步骤如下第27页
       ·cDNA 的合成第27-28页
       ·RT-PCR 扩增第28页
       ·1 %琼脂糖凝胶电泳第28页
     ·鸡胚半数感染量(EID50)的测定第28页
     ·理化试验第28-29页
       ·乙醚敏感试验第28页
       ·氯仿敏感性试验第28-29页
       ·耐酸性试验第29页
     ·最小致死剂量致鸡胚死亡的平均时间(MDT)的测定第29页
     ·1 日龄鸡脑内致病指数(ICPI) 测定第29页
 2 结果与分析第29-34页
   ·病毒的分离结果第29-30页
   ·LH01 等 4 个分离株 RT-PCR 结果第30页
   ·LH01 等 4 个分离株鸡胚半数感染量(EID50)的测定结果第30-31页
   ·LH01 等 4 个分离株理化试验结果第31-32页
   ·LH01 等 4 个分离株最小致死剂量致鸡胚死亡的平均时间(MDT)测定结果第32页
   ·LH01 等 4 个分离株对 1 日龄鸡脑内致病指数(ICPI) 测定结果第32-34页
 3 结论与讨论第34-35页
试验二 H9 亚型禽流感病毒河南分离株全基因组的克隆 与序列分析第35-58页
 1 材料与方法第35-41页
   ·材料第35-36页
     ·毒株第35页
     ·主要仪器第35页
     ·主要试剂及试剂盒第35页
     ·质粒与菌种第35页
     ·试剂的配制第35-36页
       ·琼脂糖电泳试剂第35-36页
       ·大肠杆菌转化用溶液第36页
   ·试验方法第36-41页
     ·病毒RNA 的提取第36-37页
     ·全基因的RT-PCR扩增第37-38页
       ·cDNA 第一链合成第37页
       ·PCR扩增第37-38页
     ·1 %琼脂糖凝胶电泳第38页
     ·4 株河南分离毒株全基因克隆及鉴定第38-40页
       ·RT-PCR 产物的纯化第38页
       ·PCR产物的连接第38-39页
       ·连接产物的转化第39页
       ·重组克隆的筛选第39页
       ·重组质粒的提取第39-40页
       ·重组质粒的酶切鉴定第40页
     ·4 株 H9 亚型禽流感病毒全基因组核苷酸序列测定及序列分析第40-41页
     ·4 株H9 亚型禽流感病毒全基因系统进化树分析第41页
 2 结果与分析第41-56页
   ·4 株河南分离毒株8 个基因片段的RT-PCR 扩增结果第41-42页
   ·4株河南分离毒株8个基因片段PCR产物纯化结果第42页
   ·重组质粒的酶切鉴定及测序鉴定第42-43页
   ·全基因组的测序及序列分析第43-51页
     ·HA 基因分析第43-45页
     ·NA 基因分析第45-46页
     ·PB2 基因分析第46-48页
     ·PB1 基因分析第48-49页
     ·PA 基因分析第49-51页
   ·系统进化树分析第51-56页
 3 结论与讨论第56-58页
全文总结第58-59页
参考文献第59-68页
Abstract第68-70页
附录第70-83页

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