| 致谢 | 第1-9页 |
| 摘要 | 第9-10页 |
| 英文缩写词表 | 第10-11页 |
| 文献综述 | 第11-18页 |
| 1 布鲁氏菌病概述 | 第11-12页 |
| 2 布鲁氏菌的流行状况 | 第12页 |
| 3 布鲁氏菌病的防制措施 | 第12-13页 |
| 4 布鲁氏菌病的诊断现状 | 第13-14页 |
| 5 布鲁氏菌的免疫方面 | 第14-15页 |
| 6 布鲁氏菌外膜蛋白的研究进展 | 第15-17页 |
| 7 本研究的目的意义 | 第17-18页 |
| 第一部分 布鲁氏菌部分菌体蛋白重组表达质粒的构建及诱导表达 | 第18-43页 |
| ·材料 | 第18-22页 |
| ·主要试剂 | 第18页 |
| ·菌株和菌种 | 第18页 |
| ·质粒 | 第18-20页 |
| ·引物合成 | 第20页 |
| ·试验所用试剂及配制 | 第20页 |
| ·所需的基本溶液 | 第20页 |
| ·DNA 提取所用溶液 | 第20-21页 |
| ·肠杆菌感受态细胞的制备及转化所用溶液 | 第21页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳所用溶液 | 第21页 |
| ·制备重组外膜蛋白相关试剂及其配制 | 第21页 |
| ·SDS-PAGE 试剂的配制 | 第21-22页 |
| ·重组质粒的构建 | 第22-23页 |
| ·布鲁氏菌16M 基因组的提取 | 第22页 |
| ·PCR 引物的设计与合成 | 第22页 |
| ·降落PCR 扩增目的基因 | 第22-23页 |
| ·PCR 产物的回收纯化 | 第23页 |
| ·目的片段的双酶切 | 第23页 |
| ·表达载体pET-21b 和PET-32a 的双酶切 | 第23页 |
| ·连接 | 第23页 |
| ·转化 | 第23页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第23-24页 |
| ·PCR 鉴定 | 第23-24页 |
| ·双酶切鉴定 | 第24页 |
| ·测序 | 第24页 |
| ·重组表达质粒的诱导表达与条件优化 | 第24-25页 |
| ·诱导表达 | 第24页 |
| ·蛋白表达条件的优化 | 第24-25页 |
| ·结果 | 第25-40页 |
| ·目的基因的获得 | 第25-26页 |
| ·重组质粒的双酶切鉴定 | 第26-29页 |
| ·测序结果与序列分析 | 第29-36页 |
| ·重组表达质粒的表达 | 第36-37页 |
| ·蛋白表达条件的优化 | 第37-40页 |
| ·讨论 | 第40-42页 |
| ·关于蛋白的表达 | 第41-42页 |
| 小结 | 第42-43页 |
| 第二部分 重组蛋白的纯化与抗原性鉴定 | 第43-56页 |
| ·材料 | 第43-45页 |
| ·蛋白纯化用溶液及其配制 | 第43页 |
| ·Western-blot 用溶液及其配制 | 第43页 |
| ·酶联免疫吸附试验（ELISA）相关溶液 | 第43-44页 |
| ·主要仪器和设备 | 第44-45页 |
| ·方法 | 第45-46页 |
| ·Western-blot 鉴定 | 第45页 |
| ·蛋白的纯化 | 第45-46页 |
| ·利用重组蛋白检测阳性布鲁氏菌抗体间接ELISA 方法的建立 | 第46页 |
| ·结果 | 第46-53页 |
| ·Western-blot | 第46-49页 |
| ·目的蛋白的纯化：亲和层析方法 | 第49-50页 |
| ·BP26-ELISA 检测布鲁氏菌抗体方法的建立 | 第50-53页 |
| ·讨论 | 第53-55页 |
| 小结 | 第55-56页 |
| 第三部分 重组蛋白的免疫保护力研究 | 第56-60页 |
| ·材料 | 第56页 |
| ·试剂 | 第56页 |
| ·动物 | 第56页 |
| ·方法 | 第56页 |
| ·动物分组与免疫 | 第56页 |
| ·免疫保护评价 | 第56页 |
| ·结果 | 第56-57页 |
| ·讨论 | 第57-59页 |
| 小结 | 第59-60页 |
| 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-69页 |
| ABSTRACT | 第69-70页 |
