| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-9页 |
| 缩略词表 | 第9-11页 |
| 引言 | 第11-21页 |
| 1 纺锤体组装检查点(spindle assembly checkpoint,SAC) | 第11-14页 |
| 2 单极纺锤体蛋白激酶1(monopolar spindle,Mps1) | 第14-18页 |
| ·Mps1的分布及其动粒定位 | 第15-16页 |
| ·Mps1的功能 | 第16-18页 |
| ·纺锤体检查点调控 | 第16页 |
| ·Mps1调控染色体在中期板上的排列 | 第16-17页 |
| ·中心体复制 | 第17页 |
| ·在胞质分离中的作用 | 第17页 |
| ·在DNA损伤检查点中的功能 | 第17-18页 |
| 3 Mpsl在肿瘤治疗中的应用 | 第18-19页 |
| 4 核输出信号受体(chromosome region maintenance 1,Crm1) | 第19-20页 |
| 5 研究目的意义 | 第20-21页 |
| 材料方法 | 第21-33页 |
| 1 材料 | 第21-25页 |
| ·细胞株、菌株及质粒 | 第21-22页 |
| ·抗体 | 第22页 |
| ·培养基、试剂、试剂盒 | 第22-23页 |
| ·培养基 | 第22页 |
| ·试剂及试剂盒 | 第22-23页 |
| ·细胞核染料及同步化药物 | 第23页 |
| ·引物 | 第23-24页 |
| ·仪器 | 第24-25页 |
| 2 方法 | 第25-33页 |
| ·细胞的培养、冻存和复苏 | 第25页 |
| ·引物的处理 | 第25页 |
| ·pRex-EGFP-pNES-IRES-hygro重组质粒的构建 | 第25-26页 |
| ·pRex-EGFP-Mps1△pNES1-IRES-hygro质粒的构建 | 第26页 |
| ·pRex-EGFP-MpslsiRMutpNES1△pNES2质粒的构建 | 第26-27页 |
| ·搭桥法构建 pRex-EGFP-MpslsiRMiitp]VESlApNES2ApNES3质粒 | 第27-28页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第28-29页 |
| ·琼脂糖凝胶回收 | 第29页 |
| ·蛋白质的Westrn blotting实验 | 第29-30页 |
| ·真核细胞转染 | 第30页 |
| ·细胞同步化处理 | 第30-31页 |
| ·免疫荧光实验 | 第31页 |
| ·GST-pull down | 第31-32页 |
| ·活细胞摄影实验 | 第32-33页 |
| 结果 | 第33-47页 |
| 1. CRM1与Mps1存在相互作用 | 第33-34页 |
| 2. 用软件预测Mps1的可能NES序列 | 第34-36页 |
| 3. pRex-EGFP-pNES-IRES-hygro重组质粒的构建 | 第36-37页 |
| 4. 三个NES序列对EGFP亚细胞定位的影响 | 第37-39页 |
| 5. Mps1突变质粒的构建 | 第39-40页 |
| 6. Mps1突变体的亚细胞定位 | 第40-41页 |
| 7. pNES1突变对Mps1亚细胞定位的影响 | 第41-43页 |
| 8. LMB阻止YFPMps1的间期出核,使其在细胞核内积累 | 第43-44页 |
| 9. LMB引起Mps1动粒定位增加 | 第44-45页 |
| 10. LMB引起有丝分裂进程的延缓 | 第45-47页 |
| 讨论 | 第47-50页 |
| 1. Mps1核输出信号序列的分析 | 第47-48页 |
| 2. LMB处理引起细胞周期进程延长 | 第48-49页 |
| 3 尚需解决的问题 | 第49-50页 |
| 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-63页 |
| 致谢 | 第63-65页 |
| 硕士期间发表论文 | 第65页 |
