| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 目录 | 第9-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-21页 |
| ·概述 | 第13-14页 |
| ·共轭亚油酸的主要生理功能 | 第14-15页 |
| ·抗肿瘤功能 | 第14页 |
| ·减少脂质积累功能 | 第14-15页 |
| ·共轭亚油酸的生物合成机理 | 第15-17页 |
| ·单酶催化 | 第15-16页 |
| ·复合酶催化 | 第16-17页 |
| ·共轭亚油酸生物合成技术的国内外研究现状 | 第17-18页 |
| ·cis-9，trans-11-CLA 及 trans-9，trans-11-CLA 的生物合成 | 第17-18页 |
| ·trans-10，cis-12-CLA 的生物合成 | 第18页 |
| ·本课题的立题意义与依据 | 第18-19页 |
| ·本课题的主要研究内容 | 第19-21页 |
| 第二章 His-tag 对大肠杆菌表达重组亚油酸异构酶的影响 | 第21-31页 |
| ·前言 | 第21页 |
| ·实验材料 | 第21-23页 |
| ·菌株与质粒 | 第21页 |
| ·培养基及相关溶液 | 第21-22页 |
| ·实验试剂 | 第22页 |
| ·主要仪器 | 第22-23页 |
| ·实验方法 | 第23-26页 |
| ·大肠杆菌质粒 DNA 的提取 | 第23页 |
| ·重组质粒的构建 | 第23页 |
| ·大肠杆菌的化学转化 | 第23-24页 |
| ·转化子的筛选与鉴定 | 第24页 |
| ·重组亚油酸异构酶的诱导表达 | 第24-25页 |
| ·重组大肠杆菌生长曲线测定 | 第25页 |
| ·重组亚油酸异构酶的纯化 | 第25页 |
| ·多克隆抗体的制备及 westen blot 检测 | 第25页 |
| ·重组亚油酸异构酶的酶活检测 | 第25页 |
| ·脂肪酸提取及分析 | 第25-26页 |
| ·结果与讨论 | 第26-30页 |
| ·用于表达亚油酸异构酶的大肠杆菌重组菌株的构建 | 第26页 |
| ·重组亚油酸异构酶的纯化及多克隆抗体的制备 | 第26页 |
| ·His-tag 对重组菌株生长状态的影响 | 第26-27页 |
| ·His-tag 对重组亚油酸异构酶表达的影响 | 第27-28页 |
| ·His-tag 对重组亚油酸异构酶酶活的影响 | 第28-30页 |
| ·本章小结 | 第30-31页 |
| 第三章 高山被孢霉基因操作系统的构建及亚油酸异构酶基因的整合 | 第31-41页 |
| ·前言 | 第31-32页 |
| ·实验材料 | 第32-33页 |
| ·菌株与质粒 | 第32页 |
| ·培养基及相关溶液 | 第32-33页 |
| ·实验试剂 | 第33页 |
| ·主要仪器 | 第33页 |
| ·实验方法 | 第33-36页 |
| ·重组质粒的构建 | 第33-35页 |
| ·孢子收集方法 | 第35页 |
| ·抗生素敏感性测试 | 第35页 |
| ·基因枪转化法 | 第35页 |
| ·农杆菌介导转化法 | 第35-36页 |
| ·转化子的筛选与鉴定 | 第36页 |
| ·SDS-PAGE 及 western blot 分析 | 第36页 |
| ·脂肪酸提取与分析 | 第36页 |
| ·结果与讨论 | 第36-40页 |
| ·培养条件对高山被孢霉孢子得率的影响 | 第36-37页 |
| ·过滤方法对高山被孢霉孢子得率的影响 | 第37-38页 |
| ·不同抗生素对高山被孢霉孢子萌发的抑制效果 | 第38页 |
| ·基因枪转化法和农杆菌介导转化法的比较 | 第38页 |
| ·用于表达亚油酸异构酶的高山被孢霉重组菌株的筛选 | 第38-40页 |
| ·本章小结 | 第40-41页 |
| 第四章 共轭亚油酸在耶氏解脂酵母中的生物合成 | 第41-53页 |
| ·前言 | 第41-42页 |
| ·实验材料 | 第42-43页 |
| ·菌株与质粒 | 第42页 |
| ·培养基与相关溶液 | 第42页 |
| ·实验试剂 | 第42页 |
| ·主要仪器 | 第42-43页 |
| ·实验方法 | 第43-46页 |
| ·密码子优化 | 第43页 |
| ·重组质粒的构建 | 第43-44页 |
| ·酵母菌感受态制备及乙酸锂转化 | 第44-45页 |
| ·酵母菌基因组的提取 | 第45页 |
| ·转化子的筛选与鉴定 | 第45页 |
| ·定量 PCR 分析 | 第45页 |
| ·SDS-PAGE 及 western blot 分析 | 第45页 |
| ·脂肪酸提取及分析 | 第45-46页 |
| ·结果与讨论 | 第46-51页 |
| ·共轭亚油酸异构酶基因的密码子优化 | 第46页 |
| ·重组耶氏解脂酵母菌株的构建 | 第46-47页 |
| ·多拷贝整合菌株中 opai 表达单元的拷贝数分析 | 第47-48页 |
| ·密码子优化及多拷贝整合对重组亚油酸异构酶表达水平的影响 | 第48-49页 |
| ·密码子优化及多拷贝整合对共轭亚油酸产量的影响 | 第49-51页 |
| ·本章小结 | 第51-53页 |
| 第五章 基于基因工程策略优化耶氏解脂酵母重组菌合成共轭亚油酸 | 第53-65页 |
| ·前言 | 第53-54页 |
| ·实验材料 | 第54-55页 |
| ·菌株与质粒 | 第54-55页 |
| ·实验方法 | 第55-58页 |
| ·重组质粒的构建 | 第55-57页 |
| ·酵母菌感受态制备及乙酸锂转化 | 第57页 |
| ·酵母菌基因组和总 RNA 的提取 | 第57页 |
| ·转化子的筛选与鉴定 | 第57-58页 |
| ·定量 PCR 分析 | 第58页 |
| ·SDS-PAGE 及 western blot 分析 | 第58页 |
| ·脂肪酸提取及分析 | 第58页 |
| ·结果与讨论 | 第58-64页 |
| ·重组耶氏解脂酵母菌株的构建 | 第58-59页 |
| ·多拷贝整合菌株中 opai/d12 表达单元的拷贝数分析 | 第59-61页 |
| ·启动子改造、opai/d12 共表达及多拷贝整合对 opai 的转录及表达水平的影响 | 第61-62页 |
| ·启动子改造、opai/d12 共表达及多拷贝整合对共轭亚油酸产量的影响 | 第62-64页 |
| ·本章小结 | 第64-65页 |
| 第六章 重组耶氏解脂酵母合成共轭亚油酸的发酵条件初步优化 | 第65-76页 |
| ·前言 | 第65-66页 |
| ·实验材料 | 第66页 |
| ·菌株与质粒 | 第66页 |
| ·培养基与相关溶液 | 第66页 |
| ·实验试剂 | 第66页 |
| ·主要仪器 | 第66页 |
| ·实验方法 | 第66-67页 |
| ·培养条件 | 第66-67页 |
| ·生物量的测定 | 第67页 |
| ·pH 及葡萄糖含量的测定 | 第67页 |
| ·胞内及胞外酶活的检测 | 第67页 |
| ·脂肪酸提取及分析 | 第67页 |
| ·结果与讨论 | 第67-75页 |
| ·氮含量的提高对 CLA 产量的影响 | 第67-70页 |
| ·不同浓度的亚油酸含量对 CLA 产量的影响 | 第70页 |
| ·培养基中添加大豆油替代亚油酸对 CLA 产量的影响 | 第70-72页 |
| ·重组耶氏解脂酵母菌株在 5-L 发酵罐中的 CLA 合成 | 第72-74页 |
| ·培养基中 CLA 的来源分析 | 第74-75页 |
| ·本章小结 | 第75-76页 |
| 论文主要结论 | 第76-77页 |
| 论文创新点 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-88页 |
| 附录：作者在攻读博士学位期间发表的论文 | 第88页 |
