| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 引言 | 第10-11页 |
| 1 绪论 | 第11-27页 |
| ·细胞凋亡与Bcl-2家族蛋白 | 第11-13页 |
| ·细胞凋亡 | 第11-12页 |
| ·Bcl-2家族蛋白 | 第12-13页 |
| ·Bcl-2家族代表性成员—Mcl-1蛋白 | 第13-17页 |
| ·Mcl-1的结构 | 第13-14页 |
| ·Mcl-1的表达和调控 | 第14-16页 |
| ·靶向Mcl-1在癌症治疗的应用 | 第16-17页 |
| ·小分子Bcl-2家族蛋白抑制剂—BH3 mimetics | 第17-21页 |
| ·非广谱BH3 mimetics | 第17-18页 |
| ·广谱BH3 mimetics | 第18-20页 |
| ·本研究所用BH3 mimetics | 第20-21页 |
| ·几种用于BH3 mimetics设计和优化的检测手段 | 第21-26页 |
| ·检测亲和力的方法 | 第21-22页 |
| ·检测结合模式的方法 | 第22-24页 |
| ·量热学方法 | 第24-26页 |
| ·选题依据和研究内容 | 第26-27页 |
| 2 Mcl-1蛋白的表达、纯化与性质鉴定 | 第27-48页 |
| ·引言 | 第27页 |
| ·实验材料与试剂 | 第27-30页 |
| ·菌株和载体 | 第27页 |
| ·培养基 | 第27-28页 |
| ·试剂配方 | 第28-29页 |
| ·实验仪器 | 第29-30页 |
| ·实验方法 | 第30-37页 |
| ·目的基因的克隆与载体构建 | 第30-31页 |
| ·感受态细胞的制备及转化 | 第31-32页 |
| ·蛋白表达 | 第32-33页 |
| ·蛋白纯化 | 第33-34页 |
| ·蛋白纯度与定性分析 | 第34-35页 |
| ·蛋白的浓度测定 | 第35页 |
| ·蛋白圆二色光谱的测定 | 第35-36页 |
| ·蛋白核磁图谱的测定 | 第36-37页 |
| ·蛋白活性的测定 | 第37页 |
| ·结果与讨论 | 第37-47页 |
| ·基因克隆结果 | 第37-38页 |
| ·蛋白表达结果 | 第38-41页 |
| ·蛋白纯化结果 | 第41-43页 |
| ·蛋白定量结果 | 第43-44页 |
| ·蛋白圆二色光谱的分析 | 第44页 |
| ·蛋白HSQC谱图的分析 | 第44-46页 |
| ·荧光偏振实验结果分析 | 第46-47页 |
| ·本章小结 | 第47-48页 |
| 3 量热学研究证明BH3 mimetics与Mcl-1蛋白的结合模式 | 第48-56页 |
| ·引言 | 第48页 |
| ·实验部分 | 第48-50页 |
| ·~(15)N-~1H HSQC滴定实验 | 第48-49页 |
| ·分子对接实验 | 第49页 |
| ·等温滴定量热实验(ITC) | 第49-50页 |
| ·结果与讨论 | 第50-55页 |
| ·NMR证明化合物结合于Mcl-1蛋白的BH3沟槽 | 第50-53页 |
| ·量热学研究证明化合物8与BH3沟槽形成氢键 | 第53-55页 |
| ·本章小结 | 第55-56页 |
| 4 量热学研究指导BH3 mimetics的分子优化过程 | 第56-66页 |
| ·引言 | 第56页 |
| ·实验部分 | 第56页 |
| ·结果与讨论 | 第56-64页 |
| ·化合物与Mcl-1蛋白的结合模式 | 第56-59页 |
| ·热力学参数的测定与分析 | 第59-62页 |
| ·焓变证实氢键的形成 | 第62页 |
| ·克服焓熵补偿效应指导BH3 memitics的优化 | 第62-63页 |
| ·焓效能与分子量呈直线指导BH3 mimetics的优化 | 第63-64页 |
| ·本章小结 | 第64-66页 |
| 结论 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-72页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
