| 中文摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-9页 |
| 目录 | 第9-12页 |
| 符号说明 | 第12-15页 |
| 第一部分 文献综述 | 第15-54页 |
| 第一章 镉毒性机理研究进展 | 第15-37页 |
| 1. 镉的致癌性 | 第15-17页 |
| 2. 镉与细胞增殖 | 第17-18页 |
| 3. 抑制细胞凋亡 | 第18-19页 |
| 4. 镉与肾脏 | 第19-21页 |
| 5. 镉诱导的坏死 | 第21页 |
| 6. 凋亡样死亡 | 第21-23页 |
| 7. 激酶和凋亡性死亡 | 第23-24页 |
| 8. 自体吞噬 | 第24-25页 |
| 9. 总结 | 第25-26页 |
| 参考文献 | 第26-37页 |
| 第二章 肝脏蛋白质组学研究进展 | 第37-54页 |
| 1 蛋白质组学的概念及其应用 | 第37-39页 |
| 2 蛋白质组学在肝脏急性损伤中的研究 | 第39-41页 |
| 3 蛋白质组学在病毒性肝炎中的研究 | 第41-43页 |
| 4 肝纤维化和肝硬化蛋白质组学 | 第43页 |
| 5 肝癌的蛋白组学研究 | 第43-47页 |
| 6 蛋白质组学在肝脏再生中的研究 | 第47-48页 |
| 7 结论 | 第48页 |
| 参考文献 | 第48-54页 |
| 第二部分 研究内容 | 第54-141页 |
| 第一章 镉对肝癌细胞SMMC7721的毒性损伤 | 第54-70页 |
| 1 材料和方法 | 第54-58页 |
| ·细胞系 | 第54页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第54-55页 |
| ·细胞培养与冻存 | 第55页 |
| ·镉染毒后SMMC7721细胞形态学观察 | 第55页 |
| ·镉对肝癌细胞SMMC7721存活率的影响 | 第55-56页 |
| ·镉染毒后SMMC7721细胞超微结构观察 | 第56-57页 |
| ·细胞上清中LDH活性测定 | 第57页 |
| ·镉对肝癌细胞SMMC7721凋亡的影响 | 第57-58页 |
| ·统计学分析 | 第58页 |
| 2. 结果 | 第58-65页 |
| ·镉对肝癌细胞SMMC7721形态学的影响 | 第58-59页 |
| ·镉对肝癌细胞存活率的影响 | 第59-60页 |
| ·镉对肝癌细胞SMMC7721培养上清液中LDH活性的影响 | 第60-61页 |
| ·镉对肝癌细胞SMMC7721超微结构的影响 | 第61-63页 |
| ·Hoechst 33258炅光染色结果 | 第63-64页 |
| ·流式细胞术检测细胞凋亡 | 第64-65页 |
| 3. 讨论 | 第65-67页 |
| ·镉对肝癌细胞SMMC7721细胞增殖的抑制效果 | 第65-66页 |
| ·镉染毒引起SMMC7721超微结构的改变 | 第66页 |
| ·镉染毒对细胞上清中LDH活性的影响 | 第66页 |
| ·镉诱导肝癌细胞SMMC7721发生凋亡 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-70页 |
| 第二章 氧化应激在镉致肝癌细胞SMMC7721损伤中的作用 | 第70-82页 |
| 1. 材料与方法 | 第70-72页 |
| ·细胞培养 | 第70页 |
| ·主要试剂、溶液的配置和仪器 | 第70页 |
| ·镉染毒后肝癌细胞内ROS含量测定 | 第70-71页 |
| ·镉染毒后肝癌细胞内MDA和GSH含量测定 | 第71-72页 |
| ·NAC对镉致肝癌细胞损伤的拮抗效应 | 第72页 |
| 2. 结果 | 第72-77页 |
| ·镉对肝癌细胞内ROS生成的影响 | 第72-73页 |
| ·镉对肝癌细胞内MDA含量的影响 | 第73-74页 |
| ·镉对肝癌细胞内GSH含量的影响 | 第74-75页 |
| ·NAC对镉致肝癌细胞损伤的拮抗效应 | 第75-77页 |
| 3. 讨论 | 第77-79页 |
| ·镉引起活性氧(ROS)生成产生氧化应激 | 第77-78页 |
| ·NAC对镉毒性损伤的拮抗效应 | 第78-79页 |
| 参考文献 | 第79-82页 |
| 第三章 镉对肝癌细胞SMMC7721线粒体的影响 | 第82-103页 |
| 1. 材料 | 第82-83页 |
| 2. 方法 | 第83-90页 |
| ·镉对线粒体膜电位的影响 | 第83页 |
| ·线粒体超微结构观察 | 第83页 |
| ·镉对肝癌细胞SMMC7721线粒体凋亡途径相关基因表达的影响 | 第83-87页 |
| ·凋亡相关基因蛋白水平检测 | 第87-89页 |
| ·免疫细胞化学方法检测Cyt-C | 第89-90页 |
| ·数据统计 | 第90页 |
| 3. 结果 | 第90-98页 |
| ·镉对SMMC7721线粒体膜电位(△ψm)的影响 | 第90-92页 |
| ·镉对肝癌细胞SMMC7721线粒体结构的影响 | 第92-93页 |
| ·总RNA的检测及溶解曲线分析 | 第93-94页 |
| ·基因表达定量分析结果 | 第94-96页 |
| ·Bax、Bcl-2、Cyt-c蛋白表达水平检测 | 第96-97页 |
| ·免疫细胞化学检测CytC表达 | 第97-98页 |
| 4 讨论 | 第98-100页 |
| ·镉染毒引起SMMC7721线粒体损伤 | 第98-99页 |
| ·镉诱导肝癌细胞凋亡的线粒体途径 | 第99-100页 |
| 参考文献 | 第100-103页 |
| 第四章 镉致肝癌细胞SMMC7721损伤的蛋白质组学研究 | 第103-141页 |
| 1 材料 | 第103-104页 |
| 2 方法 | 第104-112页 |
| ·实验所用试剂的配制 | 第104-106页 |
| ·细胞培养、镉染毒和蛋白样品制备 | 第106页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第106-107页 |
| ·双向凝胶电泳 | 第107-109页 |
| ·凝胶扫描和图像分析 | 第109-111页 |
| ·质谱鉴定 | 第111-112页 |
| 3 结果 | 第112-129页 |
| ·SMMC7721蛋白样品的制备 | 第112-113页 |
| ·肝癌细胞SMMC7721双向凝胶电泳方法的建立 | 第113-114页 |
| ·上样量和水化条件优化结果 | 第114-115页 |
| ·等电聚焦程序优化结果 | 第115-116页 |
| ·镉染毒后SMMC7721差异表达蛋白分析 | 第116-118页 |
| ·差异表达蛋白的质谱鉴定 | 第118页 |
| ·差异蛋白点的功能分析和分类 | 第118-119页 |
| ·根据功能分类 | 第119页 |
| ·按细胞内定位分类 | 第119-129页 |
| 4 讨论 | 第129-137页 |
| ·蛋白质组学在镉毒性机理研究上的意义 | 第129页 |
| ·肝癌细胞SMMC7721样品制备的探讨 | 第129-130页 |
| ·上样量和水化条件 | 第130-131页 |
| ·等电聚焦程序优化 | 第131页 |
| ·镉染毒对SMMC7721细胞骨架的影响 | 第131-132页 |
| ·镉染毒引起SMMC7721的应激反应 | 第132-134页 |
| ·镉染毒对硫氧还蛋白的影响 | 第134-136页 |
| ·镉染毒对其他相关蛋白的影响 | 第136-137页 |
| 参考文献 | 第137-141页 |
| 全文结论 | 第141-142页 |
| 附录 | 第142-161页 |
| 致谢 | 第161-162页 |
| 攻读博士期间发表的学术论文 | 第162-163页 |
