摘要 | 第1-5页 |
ABSTRACT | 第5-8页 |
缩略词 | 第8-10页 |
第一章 绪论(Ataxin-3 的研究进展) | 第10-17页 |
·Ataxin-3 与脊髓小脑共济失调Ⅲ型(SCA3)/马查多-约瑟夫病(MJD) | 第10-12页 |
·SCA3/MJD 概述 | 第10-11页 |
·Ataxin-3 | 第11-12页 |
·突变的Ataxin-3 与SCA3/MJD | 第12页 |
·磷酸化以及酪蛋白激酶2(CK2)与神经退行性疾病 | 第12-17页 |
·磷酸化与神经退行性疾病 | 第12-14页 |
·酪蛋白激酶2(CK2)的结构和功能 | 第14-15页 |
·CK2 底物磷酸化与神经退行性疾病 | 第15-17页 |
第二章 材料与方法 | 第17-32页 |
·大肠杆菌(JM109 和BL21(DE3))化学感受态细胞的制备 | 第17页 |
·大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第17-18页 |
·大肠杆菌质粒DNA 小量抽提 | 第18页 |
·细胞总RNA 的提取及逆转录cDNA | 第18-19页 |
·聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction, PCR) | 第19-20页 |
·DNA 样品的琼脂糖凝胶电泳 | 第20页 |
·从琼脂糖凝胶上回收DNA 片段(TaKaRa Agrose Gel DNA Purification Kit) | 第20-21页 |
·质粒DNA 或DNA 片段的限制内切性酶酶切 | 第21页 |
·DNA 片段的连接 | 第21页 |
·本论文中所用的质粒载体的构建 | 第21-22页 |
·大肠杆菌中蛋白质诱导表达 | 第22-23页 |
·蛋白质的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第23-25页 |
·GST-Tag 融合蛋白的小量纯化 | 第25页 |
·His-Tag 融合蛋白的小量纯化 | 第25-26页 |
·GST Pull-down | 第26页 |
·体外磷酸化反应(In Vitro Phosphorylation Assay) | 第26-27页 |
·Western Blot | 第27-28页 |
·细胞培养 | 第28-29页 |
·细胞转染(脂质体转染法) | 第29-30页 |
·免疫共沉淀(Co-immunocipitation, Co-IP) | 第30-32页 |
第三章 结果与讨论 | 第32-40页 |
·结果 | 第32-38页 |
·体外ataxin-3 与CK2 的相互作用 | 第32-34页 |
·在293 细胞中正常和扩展突变型ataxin-3 只和CK2β亚单位相互作用,而与α亚单位没有结合 | 第34-36页 |
·正常和扩展突变型ataxin-3 都可以被CK2 磷酸化 | 第36-38页 |
·讨论 | 第38-40页 |
参考文献 | 第40-44页 |
致谢 | 第44-45页 |
在读期间发表的学术论文与取得的其他研究成果 | 第45页 |