| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 引言 | 第12-14页 |
| 上篇 文献综述 | 第14-65页 |
| 第一章 植物与病原互作及植物免疫系统 | 第15-43页 |
| 1 植物与病原菌互作 | 第16-24页 |
| ·植物R基因结构与功能 | 第17-19页 |
| ·病原菌无毒基因及其产物 | 第19-20页 |
| ·R基因和Avr基因互作 | 第20-24页 |
| 2 植物免疫系统 | 第24-33页 |
| ·PAMPs触发的植物免疫反应(PAMP-triggered immunity,PTI) | 第24-26页 |
| ·效应分子触发的免疫反应(Effector-Triggered immunity,ETI) | 第26-33页 |
| 参考文献 | 第33-43页 |
| 第二章 病原卵菌侵染机制和效应分子的研究进展 | 第43-65页 |
| 1 卵菌(疫霉菌)的侵染机制 | 第43-46页 |
| ·疫霉菌的侵染循环 | 第43-44页 |
| ·疫霉基因组中的致病相关基因 | 第44-46页 |
| 2 卵菌的无毒基因 | 第46-54页 |
| ·克隆的卵菌的无毒基因 | 第47-52页 |
| ·卵菌无毒基因的N端寄主锚定序列 | 第52-54页 |
| 3 卵菌的RxLR家族效应分子 | 第54-57页 |
| ·疫霉基因组中RxLR效应分子的数量 | 第54页 |
| ·RXLR基因C端的保守结构 | 第54-55页 |
| ·RxLR基因C端的序列多样性 | 第55页 |
| ·RxLR基因的毒性功能 | 第55-57页 |
| 参考文献 | 第57-65页 |
| 第一章 大豆疫霉无毒基因的功能分析及研究体系建立 | 第65-89页 |
| 1 材料和方法 | 第68-74页 |
| ·大豆疫霉菌丝基因组DNA的提取 | 第69页 |
| ·效应分子基因克隆及重组质粒的构建 | 第69-70页 |
| ·农杆菌GV3101感受态细胞的制备和转化方法 | 第70-71页 |
| ·抑制BT-PCD功能分析 | 第71-72页 |
| ·目的基因在烟草中的转录水平分析 | 第72-73页 |
| ·Western Blotting检测蛋白表达 | 第73-74页 |
| 2 结果 | 第74-83页 |
| ·PVX病毒载体改造 | 第74-75页 |
| ·PVX病毒载体共表达系统的可操作性验证 | 第75-77页 |
| ·大豆疫霉无毒蛋白结构分析 | 第77-78页 |
| ·瞬时过量表达Avrlb抑制Bax诱导的HR反应 | 第78-79页 |
| ·系统表达Avrlb对烟草有毒害作用 | 第79-80页 |
| ·瞬时表达Avh331(Avr1k candidate)抑制Bax触发的烟草细胞死亡 | 第80-81页 |
| ·系统表达Avh331(Avr1k candidate)对烟草的毒性作用 | 第81-82页 |
| ·瞬时表达Avrla和Avr3a可抑制Bax触发的烟草细胞死亡 | 第82-83页 |
| 3 讨论 | 第83-85页 |
| 参考文献 | 第85-89页 |
| 第二章 大豆疫霉RxLR效应分子的毒性功能分析 | 第89-113页 |
| 1 材料和方法 | 第92-95页 |
| ·供试烟草和供试菌株的保存和培养 | 第92页 |
| ·效应分子基因克隆及重组质粒的构建 | 第92-93页 |
| ·效应分子的功能分析 | 第93页 |
| ·粒子轰击法表达效应分子 | 第93-94页 |
| ·RxLR效应分子W-motif各氨基酸的系统比较分析 | 第94页 |
| ·Avr1b及突变体酵母转化子对氧化压力的耐受性分析 | 第94-95页 |
| ·Avh5的W-motif关键氨基酸突变对BT-PCD抑制活性的影响 | 第95页 |
| ·Western Blotting检测蛋白表达 | 第95页 |
| 2 结果 | 第95-104页 |
| ·RxLR效应分子的生物信息学分析 | 第95-96页 |
| ·RxLR效应分子抑制Bax触发的PCD的功能筛选 | 第96-97页 |
| ·部分效应分子能够诱导烟草细胞死亡 | 第97-98页 |
| ·10个效应分子能够在大豆上引起细胞死亡 | 第98页 |
| ·RxLR效应分子的W-motif与抑制植物细胞死亡的功能有关 | 第98-100页 |
| ·Avr1b的W-motif与抑制真核生物细胞死亡的功能有关 | 第100-101页 |
| ·系统比较分析W-motif与抑制BT-PCD相关的氨基酸 | 第101-102页 |
| ·Avh5的W-motif第二个α螺旋与抑制BT-PCD的功能有关 | 第102-104页 |
| 3 讨论 | 第104-106页 |
| 参考文献 | 第106-113页 |
| 第三章 大豆疫霉通过程序化转录调控RxLR效应分子协同互作抑制植物防卫反应 | 第113-153页 |
| 1 材料和方法 | 第116-121页 |
| ·供试菌株、培养基制备 | 第116页 |
| ·用于MicroArray及qRT-PCR分析的大豆疫霉侵染阶段样品处理 | 第116页 |
| ·RNA的提取 | 第116-117页 |
| ·Microarray分析 | 第117页 |
| ·Real-Time PCR分析 | 第117页 |
| ·烟草中瞬时表达效应分子 | 第117-118页 |
| ·Avh238同源基因功能验证 | 第118页 |
| ·质粒构建和大豆疫霉转化 | 第118-120页 |
| ·大豆疫霉基因瞬时沉默 | 第120页 |
| ·突变体的表型分析 | 第120-121页 |
| 2 结果 | 第121-140页 |
| ·从MicroArray数据库中获得20个效应分子的表达数据 | 第121-123页 |
| ·RxLR效应分子的表达模式 | 第123-124页 |
| ·Real-Time PCR验证RxLR效应分子的表达模式 | 第124-126页 |
| ·两类效应分子作用于植物免疫反应的不同层面 | 第126-128页 |
| ·E类效应分子作用于PAMP触发的植物免疫反应 | 第128-131页 |
| ·IE类效应分子作用于效应分子及抗病蛋白触发的植物免疫反应 | 第131-134页 |
| ·两类效应分子之间存在着合作来共同抑制植物的防卫反应 | 第134-135页 |
| ·破坏E类效应分子Avh238的转录模式会影响致病力 | 第135-138页 |
| ·破坏IE类效应分子Avh172的转录模式同样会影响致病力 | 第138-139页 |
| ·瞬时沉默IE类效应分子导致致病力下降 | 第139-140页 |
| 3 讨论 | 第140-143页 |
| 参考文献 | 第143-153页 |
| 第四章 效应分子操纵植物防卫反应的策略 | 第153-177页 |
| 1 材料和方法 | 第156-157页 |
| ·供试烟草和供试菌株的保存和培养 | 第156页 |
| ·基因克隆、质粒构建及农杆菌转化 | 第156页 |
| ·效应分子抑制植物PCD功能筛选 | 第156页 |
| ·Avh238突变体构建 | 第156页 |
| ·瞬时表达目的蛋白 | 第156-157页 |
| 2 结果 | 第157-168页 |
| ·RxLR效应分子在不同生理小种中存在序列多态性 | 第157-159页 |
| ·效应分子Avh172和Avh238具有高水平的多态性 | 第159-160页 |
| ·Avh238基因多态性使其逃避了寄主的识别,但不影响其毒性功能 | 第160-161页 |
| ·Avh238第69位到82位氨基酸是触发HR的关键区域 | 第161-162页 |
| ·Avh238第82-122位氨基酸区域是抑制INF1-PCD的关键部分 | 第162-163页 |
| ·Avh238在120-134区域的点突变不影响其触发烟草细胞HR | 第163-165页 |
| ·Avh238第51位和76位氨基酸是触发烟草HR的关键氨基酸 | 第165-166页 |
| ·效应分子Avh238在植物细胞中无明确定位 | 第166-167页 |
| ·效应分子Avh238在植物细胞核中被识别触发植物免疫反应 | 第167-168页 |
| 3 讨论 | 第168-172页 |
| 参考文献 | 第172-177页 |
| 附录 | 第177-209页 |
| 全文总结及创新点 | 第209-211页 |
| 攻读博士学位期间发表的研究论文 | 第211-213页 |
| 致谢 | 第213页 |
