| 中文摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 前言 | 第10-23页 |
| ·生命是能量和结构之间的相互作用 | 第10-11页 |
| ·线粒体的基本结构、功能及特性 | 第11-17页 |
| ·线粒体的基本结构 | 第11-13页 |
| ·线粒体的基本功能 | 第13-16页 |
| ·线粒体的基因组 | 第16页 |
| ·线粒体的生成、融合、分裂和降解 | 第16-17页 |
| ·线粒体嵴的形态 | 第17-19页 |
| ·生理状态下线粒体嵴的形态 | 第17-18页 |
| ·病理状态下线粒体嵴的形态 | 第18-19页 |
| ·线粒体嵴结构的控制 | 第19页 |
| ·新近发现控制线粒体嵴结构的分子-IMMT | 第19-21页 |
| ·IMMT是位于线粒体内膜控制嵴结构的分子 | 第19-20页 |
| ·IMMT在与衰老相关疾病中的变化 | 第20-21页 |
| ·利用模式生物研究基因功能 | 第21-22页 |
| ·基因诱捕(Gene-Trap)是高通量获得突变ES细胞的基因敲除方法 | 第21-22页 |
| ·利用基因诱捕突变ES细胞建立Immt敲除鼠 | 第22-23页 |
| 材料与方法 | 第23-59页 |
| ·材料 | 第23-26页 |
| ·试剂 | 第23-24页 |
| ·限制性内切酶和主要的工具酶 | 第24页 |
| ·菌株 | 第24页 |
| ·质粒和载体 | 第24页 |
| ·细菌和细胞培养基 | 第24页 |
| ·细胞系 | 第24页 |
| ·小鼠品系 | 第24-25页 |
| ·抗体 | 第25页 |
| ·放射性核素 | 第25页 |
| ·主要仪器设备 | 第25-26页 |
| ·实验方法 | 第26-59页 |
| ·小鼠胚胎成纤维细胞滋养层的制备及培养 | 第26-27页 |
| ·ES细胞的培养 | 第27-28页 |
| ·供体囊胚的制备 | 第28-30页 |
| ·囊胚显微注射用针的制备 | 第30页 |
| ·囊胚注射操作步骤 | 第30-31页 |
| ·胚胎的子宫移植 | 第31页 |
| ·敲除鼠基因型(Genotype)鉴定 | 第31-40页 |
| ·敲除鼠表型(Phenotype)分析 | 第40-48页 |
| ·组织化学线粒体呼吸链酶反应测定 | 第48-50页 |
| ·ATP含量及生能效率的测定 | 第50-55页 |
| ·凋亡检测 | 第55-56页 |
| ·BrdU掺入法检测细胞增殖 | 第56-57页 |
| ·组织切片、HE染色和免疫组化 | 第57-59页 |
| ·统计学分析 | 第59页 |
| 实验结果 | 第59-78页 |
| ·Immt敲除鼠的建立 | 第59-65页 |
| ·小鼠胚胎干细胞滋养层细胞的获得及其生长方式 | 第59页 |
| ·基因打靶(基因诱捕)胚胎干细胞的培养和鉴定 | 第59-61页 |
| ·Immt~(+/-)突变ES进入种系 | 第61-62页 |
| ·Immt~(+/-)杂合子和Immt~(-/-)纯合子基因型的鉴定 | 第62-65页 |
| ·Immt~(-/-)纯合子胚胎致死 | 第65-70页 |
| ·Immt~(-/-)纯合子未出生 | 第65页 |
| ·Immt~(-/-)纯合子可以着床 | 第65-66页 |
| ·Immt~(-/-)胚胎只存在于E9.5天之前 | 第66页 |
| ·Immt~(-/-)纯合子在原肠胚阶段与同窝Immt~(+/+)比较没有差异,之后形态异常 | 第66-69页 |
| ·BrdU掺入实验证明Immt~(-/-)E8.5天细胞增殖 | 第69页 |
| ·TUNEL检测Immt~(-/-)在E9.5天凋亡旺盛 | 第69-70页 |
| ·Immt缺失线粒体形态异常 | 第70-72页 |
| ·Immt~(-/-)胚体细胞线粒体肿胀 | 第70页 |
| ·透射电镜观察IMMT缺失线粒体嵴紊乱 | 第70-72页 |
| ·Immt缺失导致线粒体呼吸链复合物Ⅳ——COX活性降低,线粒体的氧化呼吸功能异常 | 第72-78页 |
| ·COX酶活性下降 | 第72-73页 |
| ·SDH酶活性没有观察到显著变化 | 第73页 |
| ·ATPase酶活性没有观察到显著变化 | 第73页 |
| ·LDH酶活性没有观察到显著变化 | 第73-74页 |
| ·线粒体复合物体外活性测定结果进一步证实COX活性明显下降 | 第74-75页 |
| ·Immt~(+/-)MEF细胞线粒体膜电位上升 | 第75页 |
| ·Immt~(+/-)MEF细胞的ATP生成较Immt~(+/+)MEF低 | 第75-76页 |
| ·Immt~(+/-)MEF细胞内的活性氧(ROS)升高 | 第76-78页 |
| 讨论 | 第78-86页 |
| Immt敲除鼠的建立 | 第78-80页 |
| ·建立Immt敲除鼠的必要性 | 第78页 |
| ·基因捕获技术的运用 | 第78-80页 |
| ·Immt~(-/-)小鼠IMMT缺失有效性分析 | 第80页 |
| IMMT是胚胎发育中必需分子 | 第80-82页 |
| ·IMMT缺失不影响受精卵着床发育至原肠胚期 | 第80-81页 |
| ·IMMT缺失胚胎致死在E10.5天之前 | 第81-82页 |
| Immt在体内是维持线粒体嵴结构必需分子 | 第82-83页 |
| ·Immt是线粒体嵴形态发生的必需分子 | 第82-83页 |
| IMMT在体内是维持线粒体OXPHOS功能必需分子 | 第83-85页 |
| ·根据Immt敲除鼠致死天数推测Immt与OXPHOS功能相关 | 第83-84页 |
| ·Immt缺失导致COX活性明显下降使线粒体OXPHOS受损 | 第84-85页 |
| 小结 | 第85-86页 |
| 本研究不足与进一步实验方向 | 第86页 |
| 不足 | 第86页 |
| 今后的实验设想 | 第86页 |
| 参考文献 | 第86-91页 |
| 非论文综述 | 第91-100页 |
| 英文名词及缩写 | 第100-102页 |
| 致谢 | 第102-104页 |
| 个人简历 | 第104-107页 |
