| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-7页 |
| 前言 | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第8-22页 |
| ·核黄素及核黄素-5-磷酸酯 | 第8-11页 |
| ·核黄素的结构和功能 | 第8-9页 |
| ·核黄素-5-磷酸酯的结构和功能 | 第9-11页 |
| ·核黄素及其5-磷酸酯的工业生产方法 | 第11页 |
| ·核黄素的生物合成代谢途径 | 第11-14页 |
| ·磷酸戊糖途径 | 第11-12页 |
| ·嘌呤合成途径 | 第12页 |
| ·核黄素合成途径 | 第12-14页 |
| ·核黄素的合成代谢的调控机制 | 第14-19页 |
| ·核黄素操纵子 | 第14-16页 |
| ·ribC 基因与核黄素-5-磷酸酯的合成 | 第16页 |
| ·核黄素操纵子表达的弱化调控机理 | 第16-19页 |
| ·核黄素操纵子的组成型表达 | 第19页 |
| ·ribR 基因的功能及特点 | 第19页 |
| ·一步发酵法生产核黄素-5-磷酸酯的意义和可行性 | 第19-20页 |
| ·本文的研究内容和目的 | 第20-22页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第22-36页 |
| ·实验材料 | 第22-27页 |
| ·菌种和质粒 | 第22页 |
| ·主要仪器 | 第22-23页 |
| ·主要药品 | 第23-25页 |
| ·培养基 | 第25-26页 |
| ·主要试剂 | 第26-27页 |
| ·实验方法 | 第27-36页 |
| ·枯草芽孢杆菌染色体DNA 提取 | 第27页 |
| ·质粒的小规模提取 | 第27-28页 |
| ·PCR 扩增 | 第28-29页 |
| ·酚抽提和乙醇沉淀 | 第29页 |
| ·凝胶电泳法检测DNA | 第29页 |
| ·DNA 片段的回收纯化 | 第29-30页 |
| ·DNA 的酶切 | 第30页 |
| ·DNA 连接反应 | 第30-31页 |
| ·质粒载体去磷酸化 | 第31页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第31-32页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第32页 |
| ·B.subtilis 24A1 原生质体的制备与转化 | 第32-33页 |
| ·质粒的大规模提取 | 第33页 |
| ·发酵 | 第33-34页 |
| ·分光光度法测量发酵液中核黄素 | 第34页 |
| ·高效液相色谱法测量发酵液中的核黄素及其5-磷酸酯 | 第34-36页 |
| ·标准品的配制 | 第34页 |
| ·发酵液的预处理 | 第34-35页 |
| ·色谱分离条件 | 第35页 |
| ·流动相的组成及配制方法 | 第35页 |
| ·标准曲线的绘制 | 第35页 |
| ·发酵液中核黄素及核黄素-5-磷酸酯的定量分析 | 第35-36页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第36-51页 |
| ·ribO 区测序 | 第36-37页 |
| ·表达型载体pHP13-V 的构建 | 第37-41页 |
| ·pHP13-V 的构建策略 | 第37-39页 |
| ·veg 启动子的PCR 扩增 | 第39-40页 |
| ·重组质粒pHP13-V 的构建 | 第40-41页 |
| ·ribR 基因的克隆 | 第41-43页 |
| ·ribR 基因的克隆策略 | 第41页 |
| ·ribR 的PCR 扩增 | 第41-42页 |
| ·重组质粒pHP13-VR 的构建 | 第42-43页 |
| ·ribR 基因在枯草中的表达 | 第43-44页 |
| ·B.subtilis25和B. subtilis 26 核黄素发酵能力的测定 | 第44-46页 |
| ·核黄素及核黄素-5-磷酸酯的定量分析 | 第46-51页 |
| ·标准品色谱图 | 第46-47页 |
| ·核黄素及核黄素-5-磷酸酯的标准曲线 | 第47-48页 |
| ·发酵液样品检测 | 第48-49页 |
| ·发酵液中核黄素浓度的测定 | 第49-51页 |
| 第四章 结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-55页 |
| 致谢 | 第55页 |
