| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 1.前言 | 第8-17页 |
| ·聚γ-谷氨酸概述 | 第8-10页 |
| ·聚γ-谷氨酸的结构及理化性质 | 第8-9页 |
| ·聚γ-谷氨酸的应用 | 第9-10页 |
| ·聚γ-谷氨酸的生物合成 | 第10-12页 |
| ·合成聚γ-谷氨酸的微生物 | 第10页 |
| ·合成聚γ-谷氨酸相关的酶和基因 | 第10-11页 |
| ·溶氧在芽胞杆菌发酵生产聚γ-谷氨酸中的作用 | 第11-12页 |
| ·外源基因在芽胞杆菌中的表达 | 第12-13页 |
| ·透明颤菌血红蛋白及其研究应用进展 | 第13-16页 |
| ·透明颤菌血红蛋白简介 | 第13页 |
| ·VHb的结构与特性 | 第13-14页 |
| ·VHb的作用机制 | 第14-15页 |
| ·透明颤菌血红蛋白基因的克隆与表达 | 第15页 |
| ·VHb在芽胞杆菌中的应用 | 第15-16页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第16-17页 |
| 2 材料和方法 | 第17-25页 |
| ·实验材料 | 第17-20页 |
| ·菌株和质粒 | 第17页 |
| ·PCR引物 | 第17-18页 |
| ·培养基、培养温度及抗生素使用浓度 | 第18-19页 |
| ·工具酶及试剂 | 第19页 |
| ·各种抽提液 | 第19页 |
| ·实验仪器 | 第19-20页 |
| ·实验方法 | 第20-25页 |
| ·核酸水平操作 | 第20-21页 |
| ·DNA的体外重组操作 | 第20页 |
| ·大肠杆菌质粒的小量抽提制备 | 第20页 |
| ·芽胞杆菌总DNA的小量抽提 | 第20页 |
| ·DNA的回收及纯化 | 第20页 |
| ·PCR扩增 | 第20-21页 |
| ·重组质粒转化 | 第21-23页 |
| ·大肠杆菌感受态制备及常规转化 | 第21-22页 |
| ·枯草芽胞杆菌的电转化 | 第22页 |
| ·枯草芽胞杆菌的质粒消除 | 第22页 |
| ·地衣芽胞杆菌的Spizizen感受态转化 | 第22页 |
| ·大肠杆菌转化子的快检 | 第22-23页 |
| ·CO差光光谱法检测血红蛋白表达 | 第23页 |
| ·CO的制备 | 第23页 |
| ·样品处理与扫描 | 第23页 |
| ·摇瓶发酵培养条件 | 第23-24页 |
| ·发酵罐分批发酵培养条件 | 第24页 |
| ·生物量测定 | 第24页 |
| ·聚γ-谷氨酸含量的测定 | 第24-25页 |
| 3 结果与分析 | 第25-36页 |
| ·血红蛋白基因在地衣芽胞杆菌中的表达 | 第25-31页 |
| ·整合质粒pDG1730-vgb的构建 | 第25-27页 |
| ·地衣芽胞杆菌VHb基因整合菌株的筛选 | 第27页 |
| ·CO差光光谱法检测VHb在地衣芽胞杆菌中的表达 | 第27-28页 |
| ·地衣芽胞杆菌M2与WX-02的摇瓶发酵 | 第28-30页 |
| ·地衣芽胞杆菌M2与WX-02的发酵罐分批发酵 | 第30-31页 |
| ·血红蛋白基因在枯草芽胞杆菌中的表达 | 第31-36页 |
| ·整合载体psacB-vgb的构建 | 第31-34页 |
| ·枯草芽胞杆菌W003的电转化 | 第34页 |
| ·枯草芽胞杆菌W003的质粒消除 | 第34页 |
| ·整合质粒pDG1730-vgb在W003中的整合表达 | 第34-36页 |
| 4 讨论 | 第36-37页 |
| 参考文献 | 第37-45页 |
| 致谢 | 第45页 |