| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 缩略词(ABBREVIATIONS) | 第8-9页 |
| 1.文献综述 | 第9-22页 |
| ·枯草芽孢杆菌简介 | 第9页 |
| ·枯草芽孢杆菌表达系统 | 第9-11页 |
| ·芽孢杆菌表达系统的载体 | 第9-10页 |
| ·常用的芽孢杆菌表达系统的问题及对策 | 第10-11页 |
| ·突变的类型及其遗传学效应 | 第11-14页 |
| ·突变的共同特性 | 第11-12页 |
| ·突变的遗传学效应 | 第12-13页 |
| ·突变的遗传学 | 第13-14页 |
| ·DNA改组(DNA Shuffling)技术的发展和应用 | 第14-19页 |
| ·DNA Shuffling技术的产生 | 第14-15页 |
| ·DNA Shuffling技术的原理及步骤 | 第15页 |
| ·经典DNA Shuffling技术的改进 | 第15-17页 |
| ·DNA Shuffling技术的发展和延伸 | 第17-19页 |
| ·芽孢杆菌的蛋白酶研究 | 第19-22页 |
| 2.材料和方法 | 第22-31页 |
| ·材料 | 第22-23页 |
| ·载体和菌株 | 第22页 |
| ·主要试剂及药品 | 第22页 |
| ·主要溶液及缓冲液 | 第22-23页 |
| ·主要仪器设备 | 第23页 |
| ·PCR引物 | 第23页 |
| ·方法 | 第23-31页 |
| ·枯草芽孢杆菌nprE基因的PCR扩增和纯化 | 第23-25页 |
| ·重组质粒的构建 | 第25-27页 |
| ·枯草芽孢杆菌nprE基因家族改组策略 | 第27-29页 |
| ·重组子筛选与第二轮改组 | 第29页 |
| ·中性蛋白酶粗酶的制备 | 第29页 |
| ·中性蛋白酶的分离纯化 | 第29页 |
| ·粗酶活力测定方法 | 第29-30页 |
| ·中性蛋白酶的SDS-PAGE分析 | 第30-31页 |
| 3 结果与分析 | 第31-38页 |
| ·枯草芽孢杆菌基因组提取及目的基因的扩增 | 第31-33页 |
| ·细菌基因组DNA的提取 | 第31页 |
| ·PCR克隆中性蛋白酶全长基因片段 | 第31-32页 |
| ·野生枯草芽孢杆菌的nprE基因扩增 | 第32-33页 |
| ·P43启动子的扩增 | 第33页 |
| ·重组大肠杆菌-枯草芽孢杆菌穿梭载体PNP43-nprE的构建 | 第33-34页 |
| ·P43-nprE连接片段的鉴定 | 第33-34页 |
| ·重组质粒双酶切鉴定 | 第34页 |
| ·突变株的筛选与鉴定 | 第34-38页 |
| ·酪氨酸标准曲线的绘制 | 第34-35页 |
| ·突变株的筛选及与表达株的对比 | 第35-36页 |
| ·水解酪蛋白试验 | 第36-37页 |
| ·nprE基因产物的SDS-PAGE分析 | 第37-38页 |
| 4.讨论 | 第38-39页 |
| ·枯草芽孢杆菌中性蛋白酶 | 第38页 |
| ·有关蛋白酶突变株的筛选方法 | 第38页 |
| ·基因表达系统的选择 | 第38-39页 |
| ·实现稳定表达的策略 | 第39页 |
| 5 小结 | 第39-40页 |
| ·研究结果 | 第39页 |
| ·创新点 | 第39页 |
| ·存在的不足 | 第39-40页 |
| 参考文献 | 第40-46页 |
| 致谢 | 第46页 |