| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 缩略词表 | 第11-13页 |
| 第一部分 文献综述 | 第13-32页 |
| 第一章 猪圆环病毒研究进展 | 第13-24页 |
| 1 猪圆环病毒的发现与命名 | 第13页 |
| 2 猪圆环病毒的病毒学分类地位 | 第13-14页 |
| 3 猪圆环病毒的形态结构与理化性质 | 第14页 |
| 4 猪圆环病毒的培养特性 | 第14-15页 |
| 5 猪圆环病毒的分子生物学研究 | 第15-17页 |
| ·猪圆环病毒的基因组 | 第15页 |
| ·猪圆环病毒的复制 | 第15-16页 |
| ·猪圆环病毒编码主要蛋白 | 第16-17页 |
| ·Rep蛋白 | 第16-17页 |
| ·Cap蛋白 | 第17页 |
| 6 PCV2相关疾病 | 第17-20页 |
| ·断奶仔猪多系统衰竭综合症(PMWS) | 第17-19页 |
| ·猪皮炎和肾病综合症(PDNS) | 第19页 |
| ·A2型先天性震颤(CT) | 第19-20页 |
| ·繁殖障碍(RF) | 第20页 |
| ·猪增生性和坏死性肺炎(PNP) | 第20页 |
| 7 猪圆环病毒检测方法研究进展 | 第20-24页 |
| ·病毒分离 | 第20-21页 |
| ·间接免疫荧光(Immunofluorescence assay,IFA) | 第21页 |
| ·原位杂交技术(In situ hybridization,ISH) | 第21页 |
| ·酶联免疫吸附试验(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA) | 第21-22页 |
| ·聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction,PCR) | 第22-24页 |
| 第二章 猪瘟病毒研究进展 | 第24-31页 |
| 1 猪瘟病毒的分类地位 | 第24页 |
| 2 CSFV的形态结构与理化性质 | 第24-25页 |
| 3 CSFV的培养特性 | 第25页 |
| 4 猪瘟病毒的分子生物学研究 | 第25-29页 |
| ·猪瘟病毒的基因组 | 第25页 |
| ·CSFV编码蛋白及其功能 | 第25-29页 |
| ·核衣壳蛋白C(p14) | 第26页 |
| ·E0蛋白 | 第26-27页 |
| ·E1蛋白 | 第27页 |
| ·E2蛋白 | 第27-29页 |
| 5 猪瘟病毒的诊断 | 第29-31页 |
| ·病毒分离 | 第29页 |
| ·动物接种试验 | 第29页 |
| ·免疫荧光试验 | 第29页 |
| ·ELISA试验 | 第29-30页 |
| ·CSFV基因组检测法 | 第30-31页 |
| 第三章 本研究的目的与意义 | 第31-32页 |
| 第二部分 研究内容 | 第32-63页 |
| 第一章 猪圆环病毒Ⅱ型ORF2基因和猪瘟病毒E2基因的原核表达及纯化 | 第32-51页 |
| 1 材料 | 第32-37页 |
| ·菌株与毒株 | 第32页 |
| ·主要试剂 | 第32页 |
| ·工具酶 | 第32页 |
| ·其它试剂 | 第32页 |
| ·主要仪器设备 | 第32-33页 |
| ·常用溶液 | 第33-34页 |
| ·SDS-PAGE相关试剂和溶液 | 第34页 |
| ·SDS-PAGE胶的配制 | 第34-35页 |
| ·蛋白纯化相关试剂和溶液 | 第35-36页 |
| ·Western Blot相关试剂和溶液 | 第36-37页 |
| 2 方法 | 第37-44页 |
| ·表达载体的构建 | 第37-41页 |
| ·引物的设计与合成 | 第37页 |
| ·PCR扩增与回收 | 第37-39页 |
| ·将Cap和E2基因片段分别插入表达载体 | 第39-40页 |
| ·将重组质粒转化克隆宿主菌,筛选阳性克隆 | 第40-41页 |
| ·融合蛋白Cap和E2的诱导表达与SDS-PAGE分析 | 第41-42页 |
| ·透析袋的处理 | 第42页 |
| ·融合蛋白Cap和E2的纯化 | 第42-43页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第43页 |
| ·Western blot免疫印记鉴定表达蛋白 | 第43-44页 |
| 3 结果 | 第44-49页 |
| ·Cap、E2基因的扩增 | 第44页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第44-46页 |
| ·重组质粒的测序鉴定 | 第46页 |
| ·蛋白诱导表达及SDS-PAGE分析 | 第46-47页 |
| ·Western blot免疫印记分析 | 第47-48页 |
| ·表达产物的定量 | 第48-49页 |
| 4 讨论 | 第49-50页 |
| 5 结论 | 第50-51页 |
| 第二章 猪圆环病毒Ⅱ型Cap蛋白、猪瘟病毒E2蛋白为抗原的间接ELISA方法的建立与初步应用 | 第51-63页 |
| 1 材料 | 第51-52页 |
| 2 方法 | 第52-54页 |
| ·间接ELISA的基本操作程序 | 第52页 |
| ·间接ELISA反应条件的优化 | 第52-53页 |
| ·间接ELISA临界值的确定 | 第53页 |
| ·ELISA重复性试验 | 第53页 |
| ·临床样品测定 | 第53-54页 |
| ·间接ELISA与进口阻断ELISA试剂盒检测CSFV的符合率试验 | 第54页 |
| 3 结果 | 第54-61页 |
| ·间接ELISA反应条件的优化 | 第54-57页 |
| ·间接ELISA临界值的确定 | 第57-58页 |
| ·间接ELISA重复性测定 | 第58-60页 |
| ·临床样品检测 | 第60-61页 |
| ·间接ELISA与进口阻断ELISA抗体试剂盒检测CSFV的符合率试验 | 第61页 |
| 4 讨论 | 第61-62页 |
| 5 结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
