| 中文摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 第一章 前言 | 第9-18页 |
| ·肌肉生长抑素概述 | 第9页 |
| ·肌肉生长抑素的生物学功能及其调节机制 | 第9-12页 |
| ·肌肉生长抑素的生物学功能 | 第9-11页 |
| ·肌肉生长抑素对肌组织生长、分化的影响 | 第9-11页 |
| ·肌肉生长抑素对脂肪组织含量的影响 | 第11页 |
| ·肌肉生长抑素功能的调节机制 | 第11-12页 |
| ·肌肉生长抑素的信号传导途径 | 第12-14页 |
| ·肌肉生长抑素基因的自然突变及其表型特征 | 第14-15页 |
| ·肌肉生长抑素基因的人工诱变及其表型特征 | 第15-16页 |
| ·猪肌肉生长抑素基因的研究进展 | 第16-17页 |
| ·研究的目的和意义 | 第17-18页 |
| 第二章 猪MSTN前肽定点诱变载体在C2C12细胞中的表达 | 第18-37页 |
| ·材料与方法 | 第18-28页 |
| ·材料与试剂 | 第18-21页 |
| ·DNA样品 | 第18页 |
| ·载体、菌株和细胞株 | 第18-20页 |
| ·主要试剂及来源 | 第20页 |
| ·常用试剂的配制 | 第20-21页 |
| ·主要仪器设备 | 第21页 |
| ·常用分析软件 | 第21页 |
| ·方法 | 第21-28页 |
| ·重组真核表达载体pEGFP(-)-N1-ProMstn的构建 | 第21-24页 |
| ·定点诱变载体pEGFP(-)-N1-ProMstnD76A的构建 | 第24-25页 |
| ·重组载体瞬时转染C2C12细胞 | 第25-26页 |
| ·RT-PCR检测MSTN前肽mRNA表达 | 第26-27页 |
| ·Real-time PCR检测目的基因相对表达量 | 第27页 |
| ·数据分析 | 第27-28页 |
| ·结果 | 第28-34页 |
| ·目的基因的PCR扩增与测序 | 第28页 |
| ·重组真核表达载体的构建和鉴定 | 第28-29页 |
| ·重组载体的定点诱变 | 第29-30页 |
| ·细胞转染质粒的提取 | 第30-31页 |
| ·C2C12细胞的培养 | 第31页 |
| ·转染后细胞总RNA的提取和检测 | 第31-32页 |
| ·RT-PCR检测MSTN前肽基因转录 | 第32-33页 |
| ·MSTN前肽相对表达量的检测 | 第33-34页 |
| ·讨论 | 第34-37页 |
| 第三章 猪MSTN前肽蛋白的原核表达、纯化和功能初步鉴定 | 第37-58页 |
| ·材料与方法 | 第37-47页 |
| ·材料与试剂 | 第37-41页 |
| ·组织样品 | 第37页 |
| ·载体、菌株和细胞株 | 第37-38页 |
| ·主要试剂及来源 | 第38页 |
| ·主要试剂的配制 | 第38-41页 |
| ·主要仪器设备和分析软件 | 第41页 |
| ·方法 | 第41-47页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第41-44页 |
| ·融合蛋白的诱导表达和条件优化 | 第44-45页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析 | 第45页 |
| ·融合蛋白包涵体的提取和复性 | 第45页 |
| ·融合蛋白的纯化和标签蛋白切除 | 第45-46页 |
| ·Bradford法测定蛋白质浓度 | 第46页 |
| ·纯化蛋白的Western-blot鉴定 | 第46-47页 |
| ·C2C12细胞增殖试验 | 第47页 |
| ·数据处理 | 第47页 |
| ·结果 | 第47-55页 |
| ·重组原核表达载体的构建和鉴定 | 第47-50页 |
| ·肌肉组织总RNA的提取和检测 | 第47-48页 |
| ·猪MSTN前肽编码序列的PCR扩增 | 第48-49页 |
| ·重组原核表达载体的构建和鉴定 | 第49-50页 |
| ·诱导表达条件优化和表达形式鉴定 | 第50-53页 |
| ·融合蛋白的复性、纯化和标签切除 | 第53-54页 |
| ·重组蛋白的生物活性检测 | 第54-55页 |
| ·讨论 | 第55-58页 |
| 第四章 小结 | 第58-60页 |
| ·本研究所获得的结果 | 第58页 |
| ·本研究的创新点 | 第58-59页 |
| ·下一步工作计划 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 附录 | 第68-69页 |
