大肠杆菌双顺反子表达载体中各基因转录与表达水平的研究
| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-7页 |
| 前言 | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第8-24页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第8-9页 |
| ·pET载体介绍及应用 | 第8-9页 |
| ·克隆宿主菌和表达宿主菌 | 第9页 |
| ·β-半乳糖苷酶(GAL) | 第9-11页 |
| ·lacZ基因在基因组学中的应用 | 第10-11页 |
| ·绿色荧光蛋白 | 第11-14页 |
| ·GFP的来源、结构、性质及发光机制 | 第11-13页 |
| ·GFP的改进 | 第13-14页 |
| ·mRNA水平的定量研究 | 第14-20页 |
| ·反转录作用及意义 | 第14-16页 |
| ·半定量RT-PCR技术 | 第16-17页 |
| ·荧光定量PCR技术 | 第17-19页 |
| ·实时荧光定量PCR技术的应用 | 第19-20页 |
| ·构建并利用双顺反子生产目的产物的研究 | 第20-21页 |
| ·本课题的研究目的及研究内容 | 第21-24页 |
| ·研究目的 | 第21页 |
| ·研究内容 | 第21-23页 |
| ·技术路线 | 第23-24页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第24-36页 |
| ·实验材料 | 第24-26页 |
| ·菌株与质粒 | 第24页 |
| ·主要试剂 | 第24-25页 |
| ·主要仪器设备 | 第25-26页 |
| ·PCR反应引物 | 第26页 |
| ·培养基及常用溶液的配制 | 第26页 |
| ·实验方法 | 第26-36页 |
| ·菌株的培养 | 第26-27页 |
| ·E.coli感受态细胞的制备 | 第27页 |
| ·PCR反应 | 第27页 |
| ·酶切反应 | 第27-28页 |
| ·连接反应 | 第28页 |
| ·质粒及连接产物转化 | 第28页 |
| ·阳性重组克隆的筛选与鉴定 | 第28页 |
| ·电泳分析 | 第28-29页 |
| ·目的条带的回收 | 第29页 |
| ·E.coli质粒的小量提取（SDS-碱裂解法） | 第29页 |
| ·菌体诱导培养 | 第29页 |
| ·绿色荧光蛋白的测定 | 第29-30页 |
| ·酶活测定 | 第30-31页 |
| ·蛋白电泳验证 | 第31-32页 |
| ·RNA研究 | 第32-36页 |
| 第三章 实验结果与讨论 | 第36-50页 |
| ·质粒构建 | 第36-40页 |
| ·pET28a-lacZ’-gfpL的构建 | 第36-39页 |
| ·pET28a-lacZ’的构建 | 第39-40页 |
| ·生长曲线 | 第40-43页 |
| ·不同培养基对T-28a生长曲线的影响 | 第40-41页 |
| ·诱导温度、IPTG对T-G生长曲线的影响 | 第41-42页 |
| ·IPTG诱导分别对11 个菌株生长情况的影响 | 第42-43页 |
| ·温度梯度诱导荧光曲线及蛋白电泳验证 | 第43-44页 |
| ·菌株的评价分析 | 第44-46页 |
| ·标准曲线 | 第44-45页 |
| ·酶活及荧光值的测定 | 第45-46页 |
| ·RNA水平的研究 | 第46-50页 |
| ·RNA的提取方法的建立及结果 | 第46页 |
| ·总RNA中基因组DNA残留的检测 | 第46-47页 |
| ·RNA的定量 | 第47页 |
| ·平台期的观测 | 第47-48页 |
| ·gfp基因的mRNA表达水平 | 第48-50页 |
| 第四章 结论 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-55页 |
| 科研情况 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56页 |
