| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-8页 |
| 目录 | 第8-13页 |
| 缩略语表 | 第13-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-34页 |
| 第一节 研究背景 | 第14-31页 |
| ·肿瘤抑制因子p53 | 第14页 |
| ·p53蛋白的结构 | 第14-20页 |
| ·p53的N端区 | 第15-16页 |
| ·p53的核心区 | 第16-19页 |
| ·p53的羧端区 | 第19-20页 |
| ·p53的功能 | 第20-24页 |
| ·细胞周期控制 | 第20-22页 |
| ·细胞凋亡 | 第22-23页 |
| ·抑制血管生成 | 第23页 |
| ·DNA修复 | 第23-24页 |
| ·p53的靶基因 | 第24-26页 |
| ·p53的表达 | 第24-25页 |
| ·p53的选择性转录调节 | 第25-26页 |
| ·p53的突变 | 第26-27页 |
| ·p53突变的类型 | 第26-27页 |
| ·突变型p53的"功能缺失"(Loss of function)与"功能获得"(Gain of function) | 第27页 |
| ·突变型p53的半衰期 | 第27页 |
| ·p53基因家族 | 第27-30页 |
| ·p53基因与肿瘤基因治疗 | 第30-31页 |
| 第二节 研究目的、意义和内容 | 第31-33页 |
| ·研究目的、意义 | 第31-32页 |
| ·主要研究内容 | 第32-33页 |
| 第三节 本论文的结构安排 | 第33-34页 |
| 第二章 p53DBD基因克隆、蛋白表达与纯化 | 第34-69页 |
| 第一节 p53DBD基因克隆与表达载体构建 | 第35-54页 |
| ·材料与方法 | 第35-47页 |
| ·菌株与质粒 | 第35页 |
| ·酶和生化试剂 | 第35页 |
| ·主要仪器 | 第35-36页 |
| ·基本试剂配置 | 第36-38页 |
| ·PCR引物 | 第38页 |
| ·实验方法 | 第38-47页 |
| ·结果与讨论 | 第47-54页 |
| ·人外周血淋巴细胞总RNA的提取 | 第47-48页 |
| ·总RNA的RT-PCR | 第48-49页 |
| ·p53DNA结合结构域(p53DBD)的克隆 | 第49-50页 |
| ·克隆与序列测定 | 第50-52页 |
| ·修改开放阅读框 | 第52-53页 |
| ·讨论 | 第53-54页 |
| 第二节 p53DBD蛋白的表达与纯化 | 第54-67页 |
| ·材料与方法 | 第54-61页 |
| ·菌株与质粒 | 第54页 |
| ·酶和生化试剂 | 第54页 |
| ·主要仪器 | 第54页 |
| ·基本试剂配置 | 第54-57页 |
| ·实验方法 | 第57-61页 |
| ·结果与讨论 | 第61-67页 |
| ·蛋白表达条件的优化 | 第61-65页 |
| ·蛋白纯化 | 第65-67页 |
| ·讨论 | 第67页 |
| 第三节 本章小结 | 第67-69页 |
| 第三章 荧光光谱法研究金属离子与p53DBD的相互作用 | 第69-82页 |
| 第一节 引言 | 第69-72页 |
| ·荧光光谱法 | 第69-71页 |
| ·研究意义 | 第71-72页 |
| 第二节 材料与方法 | 第72-74页 |
| ·主要化学试剂 | 第72-73页 |
| ·主要仪器 | 第73页 |
| ·p53DBD蛋白的制备 | 第73页 |
| ·实验方法 | 第73-74页 |
| ·荧光滴定 | 第73页 |
| ·圆二色谱研究 | 第73页 |
| ·ANS结合研究 | 第73-74页 |
| 第三节 结果与讨论 | 第74-80页 |
| ·p53DBD蛋白的内源荧光性质 | 第74-75页 |
| ·金属离子与肿瘤抑制蛋白p53DBD的结合 | 第75-79页 |
| ·p53DBD二级结构的变化 | 第79页 |
| ·p53DBD蛋白表面疏水性研究 | 第79-80页 |
| 第四节 本章小结 | 第80-82页 |
| 第四章 镁离子对p53DBD蛋白与靶基因结合的影响 | 第82-95页 |
| 第一节 引言 | 第82-84页 |
| ·研究方法 | 第82-83页 |
| ·研究意义 | 第83-84页 |
| 第二节 材料和方法 | 第84-87页 |
| ·主要试剂 | 第84页 |
| ·主要仪器 | 第84-85页 |
| ·p53DBD靶基因 | 第85页 |
| ·p53DBD靶基因序列 | 第85页 |
| ·退火 | 第85页 |
| ·p53DBD蛋白的制备 | 第85页 |
| ·实验方法 | 第85-87页 |
| ·荧光滴定 | 第86页 |
| ·圆二色谱研究 | 第86页 |
| ·电泳迁移分析 | 第86-87页 |
| ·Zeta电势(Zeta Potential)测量 | 第87页 |
| 第三节 结果与讨论 | 第87-94页 |
| ·离子竞争性结合分析 | 第87-88页 |
| ·圆二色谱分析 | 第88-89页 |
| ·镁离子对p53DBD蛋白与靶基因结合的影响 | 第89-93页 |
| ·探讨镁离子作用机制 | 第93-94页 |
| 第四节 本章小结 | 第94-95页 |
| 第五章 金属离子对p53DBD蛋白结构稳定性的影响 | 第95-105页 |
| 第一节 引言 | 第95-96页 |
| ·研究方法 | 第95页 |
| ·研究意义 | 第95-96页 |
| 第二节 材料和方法 | 第96-98页 |
| ·主要试剂 | 第96页 |
| ·主要仪器 | 第96页 |
| ·p53DBD蛋白的制备 | 第96页 |
| ·实验方法 | 第96-98页 |
| ·解折叠平衡实验 | 第96-97页 |
| ·差示扫描热量(DSC)测量 | 第97页 |
| ·ANS结合测量 | 第97页 |
| ·丙烯酰胺滴定分析 | 第97-98页 |
| 第三节 结果与讨论 | 第98-104页 |
| ·GdmHCl诱导的p53DBD蛋白解折叠平衡 | 第98-100页 |
| ·金属离子对p53DBD蛋白变性温度Tm的影响 | 第100页 |
| ·尿素诱导p53DBD变性过程中蛋白疏水性变化 | 第100-101页 |
| ·尿素诱导变性过程中金属离子结合引起p53DBD蛋白的结构变化 | 第101-103页 |
| ·讨论 | 第103-104页 |
| 第四节 本章小结 | 第104-105页 |
| 第六章 p53DBD与其靶基因相互作用的FRET研究 | 第105-117页 |
| 第一节 引言 | 第105-111页 |
| ·FRET相关原理及计算方法 | 第105-110页 |
| ·荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET) | 第105-106页 |
| ·FRET常用供受体对 | 第106-107页 |
| ·FRET实验仪器 | 第107-108页 |
| ·FRET的计算 | 第108-109页 |
| ·静态荧光技术和时间分辨荧光技术 | 第109-110页 |
| ·研究意义 | 第110-111页 |
| 第二节 材料和方法 | 第111-112页 |
| ·p53DBD蛋白的制备 | 第111页 |
| ·荧光标记的靶基因的合成 | 第111-112页 |
| ·合成单链荧光标记靶DNA | 第111页 |
| ·退火 | 第111-112页 |
| ·时间分辨的荧光寿命测量 | 第112页 |
| ·主要仪器装置 | 第112页 |
| ·测试样品制备 | 第112页 |
| ·测量参数设置 | 第112页 |
| 第三节 结果与讨论 | 第112-116页 |
| ·荧光寿命衰减曲线及其拟合 | 第112-114页 |
| ·数据处理 | 第114-115页 |
| ·靶基因DNA末端之间距离 | 第114页 |
| ·靶基因DNA弯曲角度 | 第114-115页 |
| ·讨论 | 第115-116页 |
| 第四节 本章小结 | 第116-117页 |
| 第七章 结论与展望 | 第117-122页 |
| 第一节 主要结论 | 第117-118页 |
| 第二节 展望 | 第118-122页 |
| ·金属离子对p53DBD作用的晶体研究 | 第119-120页 |
| ·p53DBD与靶基因相互作用的单分子力学研究 | 第120-122页 |
| 参考文献 | 第122-131页 |
| 致谢 | 第131-132页 |
| 个人简历 | 第132-133页 |
| 在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第133页 |
