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甜菜亚硝酸还原酶(NiR)基因的克隆及其表达分析

摘要第1-13页
英文摘要第13-15页
1 引言第15-39页
   ·研究的目的和意义第15-16页
   ·国内外研究现状第16-32页
     ·植物氮素营养的相关研究第16-18页
     ·植物氮素的吸收和代谢研究第18-22页
     ·关于植物氮素同化机理的研究第22-24页
     ·关于植物氮素同化相关酶的研究第24-26页
     ·植物氮代谢相关酶基因的研究第26-30页
     ·亚硝酸还原酶的相关研究第30-32页
   ·实时荧光定量PCR 的研究第32-37页
     ·荧光探针和荧光染料第33-35页
     ·实时荧光定量 PCR 技术的应用第35-37页
   ·基因克隆的方法第37页
   ·本研究课题的来源及主要研究内容第37-39页
     ·本研究课题的来源第37页
     ·本研究的主要内容第37-39页
2 材料与方法第39-67页
   ·试验材料第39-40页
     ·供试品种第39页
     ·供试菌种及质粒第39页
     ·主要酶、试剂盒及生化试剂第39-40页
     ·主要仪器设备第40页
   ·试验设计第40-46页
     ·引物设计第40-42页
     ·试验研究方法第42-46页
   ·甜菜亚硝酸还原酶CDNA 的克隆第46-59页
     ·甜菜叶片总RNA 的提取第46-47页
     ·反转录合成cDNA 的第一链第47-48页
     ·cDNA 3′端的克隆第48-51页
     ·cDNA 5′端的克隆第51-56页
     ·中间片段P0 的克隆第56页
     ·cDNA 全长的克隆第56-59页
   ·甜菜亚硝酸还原酶基因组DNA 的克隆第59-60页
     ·试验材料甜菜的用前准备第59页
     ·gDNA 的提取第59页
     ·gDNA 的完整性分析第59页
     ·gDNA 全长的克隆第59-60页
   ·甜菜亚硝酸还原酶的生物信息学分析第60-62页
     ·生物信息学软件和网络服务器第60-61页
     ·甜菜NiR 基因编码蛋白的结构分析第61页
     ·甜菜NiR 基因编码蛋白的功能分析第61-62页
   ·环境因子对甜菜亚硝酸还原酶活力的影响及基因表达研究第62-67页
     ·铵态氮不同处理条件下的NiR 活力测定及基因表达第62-65页
     ·硝态氮不同处理条件下的NiR 活力测定及基因表达第65页
     ·氮素的不同形态配比处理条件下的NiR 活力测定及基因表达第65页
     ·NaCl 对甜菜NiR 活力及基因表达的影响第65-66页
     ·N02-对甜菜NiR 活力及基因表达的影响第66页
     ·放线菌酮对甜菜NiR 活力及基因表达的影响第66-67页
3 结果与分析第67-111页
   ·甜菜亚硝酸还原酶(NIR)全长CDNA 的克隆第67-74页
     ·甜菜总RNA 的提取及检测第67页
     ·cDNA 3′端的克隆第67-69页
     ·cDNA 5′端的克隆第69-71页
     ·中间片段P0 的克隆第71-72页
     ·cDNA 全长的克隆第72-74页
   ·甜菜亚硝酸还原酶基因组DNA(GDNA)的克隆第74-77页
     ·甜菜gDNA 的提取和检测第74-75页
     ·gDNA 全长的克隆第75页
     ·扩增产物的克隆、测序第75-77页
   ·甜菜亚硝酸还原酶的生物信息学分析第77-96页
     ·甜菜NiR 基因编码蛋白的结构分析第77-94页
     ·甜菜NiR 基因编码蛋白的功能分析第94-96页
   ·环境因子对甜菜亚硝酸还原酶活力的影响及基因表达的影响第96-111页
     ·铵态氮处理下对甜菜NiR 活力和基因表达的影响第97-100页
     ·硝态氮处理下对甜菜NiR 活力和基因表达的影响第100-102页
     ·不同氮素形态配比处理下对甜菜NiR 活力和基因表达的影响第102-104页
     ·氮素诱导后NaCl 处理甜菜NiR 活力和基因表达的影响第104-106页
     ·氮素诱导后N02-处理甜菜NiR 活力和基因表达的影响第106-108页
     ·氮素诱导后放线菌酮处理甜菜NiR 活力和基因表达的影响第108-111页
4 讨论第111-117页
   ·甜菜品种的选定第111页
   ·甜菜叶片总RNA 的提取第111页
   ·RACE 扩增方法的可行性第111-112页
   ·甜菜亚硝酸还原酶的生物信息学分析第112页
   ·甜菜NIR 基因的内含子分析第112-113页
   ·甜菜NIR 的3D 结构分析第113页
   ·实时荧光定量PCR 方法的采用第113-115页
   ·环境因子对亚硝酸还原酶(NIR)的影响第115-116页
   ·NIR 分子机制的初步探讨第116-117页
5 结论第117-119页
致谢第119-120页
参考文献第120-132页
附录第132-142页
攻读博士学位期间发表的学术论文第142页

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