| 中文摘要 | 第1-5页 |
| 英文摘要 | 第5-9页 |
| 缩略词 | 第9-10页 |
| 1 绪论 | 第10-19页 |
| ·引言 | 第10-11页 |
| ·研究背景及进展 | 第11-16页 |
| ·金龟子绿僵菌研究进展 | 第11-12页 |
| ·金龟子绿僵菌致病机制及相关基因的研究进展 | 第12-14页 |
| ·RNA 干扰技术在病原性真菌研究中的应用进展 | 第14-16页 |
| ·立题依据和研究目标 | 第16-17页 |
| ·研究内容 | 第17页 |
| ·技术路线 | 第17页 |
| ·本研究创新之处 | 第17-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-34页 |
| ·材料 | 第19-21页 |
| ·供试菌株和昆虫 | 第19页 |
| ·主要仪器设备 | 第19-20页 |
| ·主要试剂 | 第20页 |
| ·主要培养基及溶液 | 第20-21页 |
| ·金龟子绿僵菌 Mmnt1 和Mpt 基因cDNA 全长的获取 | 第21-26页 |
| ·引物的设计 | 第21-22页 |
| ·金龟子绿僵菌侵染蝗虫血淋巴后期总RNA 的提取及反转录 | 第22-23页 |
| ·金龟子绿僵菌Mmnt1 基因cDNA 5'端序列的扩增和克隆 | 第23-25页 |
| ·金龟子绿僵菌Mpt 基因cDNA 5'端序列的扩增和克隆 | 第25-26页 |
| ·金龟子绿僵菌Mmnt1、Mpt 基因DNA 全长的获取 | 第26页 |
| ·生物信息学分析 | 第26页 |
| ·金龟子绿僵菌Mpt 基因的表达谱分析 | 第26-28页 |
| ·金龟子绿僵菌不同侵染时期总RNA 的提取及反转录 | 第26-27页 |
| ·目标基因特异性引物和内参基因引物的设计 | 第27页 |
| ·荧光定量PCR 检测Mpt 基因在不同侵染的表达量变化 | 第27-28页 |
| ·Mmnt1 基因的干扰 | 第28-34页 |
| ·目的基因干扰片段的扩增及酶切 | 第29页 |
| ·双酶切干扰载体（pbar-RNAi-gpd-trp） | 第29-30页 |
| ·干扰载体与Mmnt1 基因干扰片段的连接 | 第30页 |
| ·连接后的载体pbar-RNAi-gpd-trp-Mmnt1 的克隆 | 第30页 |
| ·转化金龟子绿僵菌CQMa102 菌株 | 第30-32页 |
| ·荧光定量PCR 技术检测干扰突变菌株的RNA 干扰效率 | 第32页 |
| ·干扰突变株性状分析 | 第32-34页 |
| 3 结果和分析 | 第34-50页 |
| ·Mmnt1、Mpt 基因的cDNA 全长和DNA 全长的获取 | 第34-42页 |
| ·Mmnt1 基因cDNA 的5'端序列扩增 | 第34页 |
| ·Mpt 基因cDNA 的5'端序列扩增 | 第34-35页 |
| ·Mmnt1 基因cDNA 的3'端序列和5'端序列拼接 | 第35-36页 |
| ·Mpt 基因cDNA3’端序列和5’端序列拼接 | 第36页 |
| ·Mmnt1、Mpt 基因DNA 序列的获取 | 第36-38页 |
| ·生物信息学分析结果 | 第38-42页 |
| ·Mpt 基因的表达谱分析 | 第42-43页 |
| ·Mmnt1 基因RNA 干扰分析 | 第43-50页 |
| ·RNA 干扰效率的检测 | 第44-45页 |
| ·RNA 干扰突变株表型分析 | 第45页 |
| ·干扰突变株和野生株生物量测定 | 第45-46页 |
| ·高渗透压对干扰菌株的影响 | 第46-47页 |
| ·细胞壁破坏因子对干扰菌株的影响 | 第47页 |
| ·氧胁迫对干扰菌株的影响 | 第47-48页 |
| ·干扰突变株和野生株的室内毒力测定 | 第48-50页 |
| 4 讨论 | 第50-55页 |
| ·丝状真菌基因功能研究的方法 | 第50-53页 |
| ·基因敲除( gene knockout) | 第50-51页 |
| ·RNAi（RNA interference） | 第51页 |
| ·超表达(over expression) | 第51-52页 |
| ·酵母单/双杂交技术( yeast one / two hybrid) | 第52-53页 |
| ·Mpt 基因与真菌的次生代谢调控有关 | 第53页 |
| ·Mmnt1 基因影响真菌细胞壁完整性及真菌的毒力 | 第53-55页 |
| 5 结论与后续工作建议 | 第55-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-65页 |
| 附录 | 第65页 |
