| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 1 引言 | 第9-18页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第9页 |
| ·木聚糖酶概述 | 第9-15页 |
| ·木聚糖酶简介及其来源 | 第9-10页 |
| ·木聚糖酶的结构 | 第10页 |
| ·木聚糖酶特性 | 第10-11页 |
| ·木聚糖酶诱导与发酵 | 第11页 |
| ·木聚糖酶酶活测定方法 | 第11-12页 |
| ·木聚糖酶的应用 | 第12-13页 |
| ·基因工程研究 | 第13页 |
| ·木聚糖酶的研究现状、存在的问题及研究热点 | 第13-15页 |
| ·毕赤酵母表达系统 | 第15-16页 |
| ·本研究的主要内容和目标 | 第16-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-31页 |
| ·材料 | 第18-20页 |
| ·菌株与材料 | 第18页 |
| ·酶和生化试剂 | 第18页 |
| ·仪器设备 | 第18-19页 |
| ·培养基及相关溶液 | 第19-20页 |
| ·木聚糖酶基因xynA 的克隆 | 第20-25页 |
| ·引物设计与合成 | 第20页 |
| ·疏棉状嗜热丝孢菌总RNA 的提取 | 第20-21页 |
| ·反转录合成cDNA 第一条链 | 第21页 |
| ·木聚糖酶基因全长cDNA 片段的克隆 | 第21页 |
| ·扩增产物验证 | 第21页 |
| ·PCR 产物回收 | 第21-22页 |
| ·克隆质粒pMD18-T-xynA 的构建 | 第22-23页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备 | 第23页 |
| ·转化大肠杆菌JM109 感受态细胞 | 第23-24页 |
| ·蓝白斑筛选阳性克隆 | 第24页 |
| ·克隆基因的验证 | 第24-25页 |
| ·xynA 基因表达载体的构建、验证和测序 | 第25-26页 |
| ·毕赤酵母细胞的转化 | 第26-31页 |
| ·重组表达载体的线性化 | 第26页 |
| ·毕赤酵母感受态细胞的制备及转化 | 第26页 |
| ·甲醇利用表型的确定 | 第26页 |
| ·多拷贝转化子的筛选 | 第26页 |
| ·酵母基因组DNA 的提取 | 第26-27页 |
| ·重组酵母的PCR 验证 | 第27页 |
| ·目的基因在毕赤酵母中的表达 | 第27页 |
| ·转化子遗传稳定性实验 | 第27页 |
| ·SDS-PAGE 凝胶的制备及发酵上清液的蛋白质电泳 | 第27-28页 |
| ·木聚糖酶活性的测定 | 第28页 |
| ·可溶性蛋白的测定 | 第28-29页 |
| ·粗酶液的酶学性质 | 第29-31页 |
| 3 结果与分析 | 第31-42页 |
| ·疏棉状嗜热丝孢菌木聚糖酶基因的克隆 | 第31页 |
| ·重组质粒的酶切验证 | 第31-32页 |
| ·xynA 基因测序及序列分析 | 第32-33页 |
| ·xynA 基因表达载体的构建及鉴定 | 第33-34页 |
| ·xynA 基因在毕赤酵母中的表达及表达产物分析 | 第34-42页 |
| ·重组酵母甲醇利用表型的确定 | 第34-35页 |
| ·多拷贝转化子的筛选 | 第35-36页 |
| ·重组毕赤酵母的PCR 鉴定 | 第36页 |
| ·高表达量重组酵母的筛选 | 第36-37页 |
| ·重组毕赤酵母的摇瓶诱导 | 第37页 |
| ·转化子遗传稳定性试验 | 第37-38页 |
| ·发酵液上清SDS-PAGE 检测 | 第38页 |
| ·重组酵母xynA 的酶学性质 | 第38-42页 |
| 4 讨论 | 第42-45页 |
| ·疏棉状嗜热丝孢菌总RNA 的提取 | 第42页 |
| ·疏棉状嗜热丝孢菌SY-2 xynA 基因在毕赤酵母中的分泌表达 | 第42-44页 |
| ·酵母工程菌xynA 基因的酶学性质 | 第44-45页 |
| 5 结论 | 第45-46页 |
| 6 参考文献 | 第46-51页 |
| 7 在读期间发表论文 | 第51-52页 |
| 8 作者简介 | 第52-53页 |
| 9 致谢 | 第53-54页 |