| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 1 引言 | 第10-25页 |
| ·乳酸链球菌素 | 第10-16页 |
| ·乳酸链球菌素的发现和研究历史 | 第10-11页 |
| ·乳酸链球菌素的结构和生物合成 | 第11-13页 |
| ·Nisin 理化性质及生物学功能 | 第13页 |
| ·Nisin 的作用模式 | 第13-14页 |
| ·Nisin 的应用 | 第14-16页 |
| ·乳铁蛋白肽 | 第16-18页 |
| ·乳铁蛋白的分布 | 第16页 |
| ·牛乳铁蛋白的结构 | 第16-17页 |
| ·牛乳铁蛋白生物学功能 | 第17-18页 |
| ·大肠杆菌和毕赤酵母表达系统 | 第18-23页 |
| ·大肠杆菌表达系统 | 第18-20页 |
| ·毕赤酵母表达系统 | 第20-23页 |
| ·研究的目的和意义 | 第23-25页 |
| 2 Nisin-rbLF-N 融合基因的构建及测序分析 | 第25-35页 |
| ·材料 | 第25-27页 |
| ·动物材料 | 第25页 |
| ·质粒与菌株 | 第25页 |
| ·工具酶与化学试剂 | 第25页 |
| ·培养基及常用溶液的配制 | 第25-26页 |
| ·主要仪器设备 | 第26-27页 |
| ·试验方法 | 第27-30页 |
| ·引物设计、合成 | 第27页 |
| ·牛肉总DNA 的提取 | 第27-28页 |
| ·重组质粒pGEM-T easy／nisin-rbLF-N 的构建与鉴定 | 第28页 |
| ·目的基因的PCR 产物的回收 | 第28-29页 |
| ·构建测序载体 | 第29页 |
| ·转化大肠杆菌DH5α | 第29页 |
| ·质粒提取与酶切鉴定 | 第29-30页 |
| ·PCR 产物的DNA 序列分析 | 第30页 |
| ·结果与分析 | 第30-32页 |
| ·目的基因的获得 | 第30-31页 |
| ·重组质粒pGEM-T easy/nisin-rbLF-N -1 双酶切鉴定 | 第31-32页 |
| ·基因片段分析 | 第32-33页 |
| ·讨论 | 第33-35页 |
| 3 Nisin-rbLF-N 融合基因原核表达载体构建、表达、复性和活性检测 | 第35-44页 |
| ·材料 | 第35-37页 |
| ·质粒与菌株 | 第35页 |
| ·工具酶与化学试剂 | 第35页 |
| ·培养基及常用溶液的配制 | 第35-36页 |
| ·主要仪器设备 | 第36-37页 |
| ·试验方法 | 第37-39页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第37-38页 |
| ·重组大肠杆菌菌株的培养与诱导表达 | 第38页 |
| ·包含体的收集 | 第38页 |
| ·包含体的复性 | 第38-39页 |
| ·菌体总蛋白的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE） | 第39页 |
| ·表达产物的抗菌活性检测 | 第39页 |
| ·结果与分析 | 第39-42页 |
| ·nisin-rbLF-N- 1 基因片段的扩增 | 第39-40页 |
| ·重组表达质粒pGEX-4T1/ nisin-rbLF-N 双酶切鉴定 | 第40页 |
| ·重组融合蛋白的表达 | 第40-41页 |
| ·重组蛋白的复性及抗菌活性的初步检测 | 第41-42页 |
| ·讨论 | 第42-44页 |
| 4 Nisin-rbLF-N 融合基因真核表达载体构建、表达、和活性检测 | 第44-60页 |
| ·材料 | 第44-47页 |
| ·质粒与菌株 | 第44页 |
| ·工具酶与化学试剂 | 第44页 |
| ·贮备液和培养基 | 第44-45页 |
| ·主要试剂及溶液 | 第45-46页 |
| ·主要仪器和设备 | 第46-47页 |
| ·试验方法 | 第47-54页 |
| ·转化大肠杆菌DH5α | 第47页 |
| ·质粒提取 | 第47页 |
| ·PCR 引物的设计 | 第47-48页 |
| ·nisin-rbLF-N 基因克隆载体构建 | 第48-49页 |
| ·nisin-rbLF-N 基因表达载体的构建 | 第49-50页 |
| ·毕赤酵母的转化 | 第50-51页 |
| ·高拷贝整合转化子筛选 | 第51-52页 |
| ·重组转化子甲醇利用型的平板筛选 | 第52页 |
| ·重组子的PCR 鉴定 | 第52-53页 |
| ·nisin-rbLF-N 基因在毕赤酵母G5115 中的诱导表达 | 第53页 |
| ·表达上清的检测 | 第53-54页 |
| ·结果与分析 | 第54-58页 |
| ·构建重组质粒 | 第54-55页 |
| ·高拷贝整合转化子筛选 | 第55页 |
| ·酵母转化子的甲醇利用表型筛选 | 第55-56页 |
| ·酵母转化子PCR 鉴定 | 第56页 |
| ·SDS-PAGE 电泳检测 | 第56-57页 |
| ·抑菌检测 | 第57-58页 |
| ·讨论 | 第58-60页 |
| 5 结论和展望 | 第60-62页 |
| ·结论 | 第60页 |
| ·Nisin-rbLF-N 融合基因的构建 | 第60页 |
| ·Nisin-rbLF-N 融合基因原核表达载体构建、表达 | 第60页 |
| ·Nisin-rbLF-N 融合基因真核表达载体构建、表达 | 第60页 |
| ·展望 | 第60-62页 |
| ·原核表达 | 第60-61页 |
| ·真核表达 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-68页 |
| 附录 | 第68-78页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第78-79页 |
| 作者简历 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
