| 缩写词表 | 第10-11页 |
| 摘要 | 第11-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 第一章 前言 | 第14-22页 |
| 1. 多形性成胶质细胞瘤(Glioblastoma Multiforme,GBM) | 第14-17页 |
| 1.1 对于GBM的简介 | 第14页 |
| 1.2 对于GBM的临床诊断与治疗 | 第14-16页 |
| 1.3 对于GBM发病机理的研究 | 第16-17页 |
| 2. Ninjurin-2相关介绍 | 第17-20页 |
| 2.1 Ninjurin家族简介及早期研究 | 第17-18页 |
| 2.2 Ninjurin家族其他分子功能及机制研究 | 第18-20页 |
| 2.2.1 Ninjurin-1 | 第19-20页 |
| 2.2.2 Ninjurin A | 第20页 |
| 3. 本研究的目的及意义 | 第20-22页 |
| 第二章 材料和方法 | 第22-57页 |
| 1. 试剂及材料 | 第22-23页 |
| 2. 部分试剂配方 | 第23-28页 |
| 3. 实验设备 | 第28-29页 |
| 4. 实验方法 | 第29-57页 |
| 4.1 分子克隆部分 | 第29-37页 |
| 4.1.1 DNA琼脂糖凝胶电泳 | 第29页 |
| 4.1.2 质粒的设计及构建(Ⅰ) | 第29-30页 |
| 4.1.3 PCR反应 | 第30-31页 |
| 4.1.4 胶回收及纯化 | 第31-32页 |
| 4.1.5 酶切反应 | 第32-33页 |
| 4.1.6 连接反应 | 第33页 |
| 4.1.7 质粒的设计及构建(Ⅱ) | 第33-34页 |
| 4.1.8 克隆产物及质粒DNA的转化 | 第34-35页 |
| 4.1.9 小量抽提质粒DNA | 第35-36页 |
| 4.1.10 中量抽提质粒DNA | 第36-37页 |
| 4.2 细胞相关实验部分 | 第37-46页 |
| 4.2.1 U87-MG及U251细胞的培养 | 第37-39页 |
| 4.2.2 Lipofectamine 3000转染试剂进行细胞转染 | 第39-40页 |
| 4.2.3 慢病毒感染细胞 | 第40页 |
| 4.2.4 稳定表达细胞系的构建 | 第40-41页 |
| 4.2.5 稳定细胞系药物筛选及单克隆稳定细胞系的建立 | 第41-42页 |
| 4.2.6 CCK-8检测细胞活率及绘制细胞生长曲线 | 第42页 |
| 4.2.7 细胞流式检测凋亡 | 第42-43页 |
| 4.2.8 细胞流式检查细胞周期 | 第43-44页 |
| 4.2.9 细胞划痕修复实验 | 第44-45页 |
| 4.2.10 细胞吸收外源BrdU及其染色 | 第45-46页 |
| 4.2.11 细胞免疫荧光染色 | 第46页 |
| 4.3 体内及组织实验部分 | 第46-50页 |
| 4.3.1 裸鼠皮下成瘤及测量 | 第46页 |
| 4.3.2 裸鼠脑定位成瘤及活体成像 | 第46-48页 |
| 4.3.3 小鼠活体灌注及脑组织收取 | 第48-49页 |
| 4.3.4 组织脱水与石蜡包埋 | 第49-50页 |
| 4.3.5 石蜡切片及HE染色 | 第50页 |
| 4.4 生化分子检测相关部分 | 第50-57页 |
| 4.4.1 RNA-seq检测相关 | 第50-51页 |
| 4.4.2 Trizol法提取细胞样品RNA | 第51-52页 |
| 4.4.3 RNA逆转录 | 第52页 |
| 4.4.4 实时荧光定量PCR | 第52-54页 |
| 4.4.5 细胞总蛋白提取及制样 | 第54页 |
| 4.4.6 蛋白质免疫印迹法(western blot) | 第54-57页 |
| 第三章 实验结果与分析 | 第57-77页 |
| 1. NINJ2基因与神经胶质瘤之间的关系 | 第57-58页 |
| 2. 过表达NINJ2基因会导致U87-MG等恶性胶质瘤细胞死亡 | 第58-62页 |
| 2.1 过表达NINJ2基因会降低U87-MG的细胞活率及抑制其生长 | 第58-60页 |
| 2.2 过表达NINJ2基因会引起U87-MG等胶质瘤细胞进行早期凋亡 | 第60-62页 |
| 3. 过表达NINJ2基因不影响U87-MG的细胞迁移 | 第62-63页 |
| 4. 过表达NINJ2基因不影响U87-MG的细胞周期分布 | 第63-66页 |
| 5. 裸鼠体内U87-MG细胞进行肿瘤外植实验结果 | 第66-69页 |
| 5.1 裸鼠皮下U87-MG细胞成瘤实验结果 | 第66-67页 |
| 5.2 裸鼠脑定位注射U87-MG细胞成瘤实验结果 | 第67-69页 |
| 6. 对于Ninjurin-2作用于U87-MG细胞的分子机制的初步探索 | 第69-77页 |
| 6.1 RNA-seq结果展示及分析 | 第70-73页 |
| 6.2 Ninjurin2作用于U87-MG与蛋白合成紊乱所引起的细胞应激相关 | 第73-77页 |
| 第四章 讨论 | 第77-79页 |
| 参考文献 | 第79-82页 |
| 致谢 | 第82页 |
