| 资助项目 | 第2-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 第1章 绪论 | 第19-32页 |
| 1.1 MicroRNA的研究概况 | 第19-26页 |
| 1.1.1 miRNA的发现历程 | 第19-20页 |
| 1.1.2 miRNA的生物合成 | 第20-21页 |
| 1.1.3 miRNA的调控机理 | 第21-22页 |
| 1.1.4 miRNA的特征 | 第22页 |
| 1.1.5 miRNA的鉴定 | 第22-24页 |
| 1.1.6 miRNA的生物学功能 | 第24-25页 |
| 1.1.7 miRNA、RNAi和siRNA | 第25-26页 |
| 1.2 BmCPV与病毒miRNA | 第26-28页 |
| 1.2.1 BmCPV简介 | 第26-27页 |
| 1.2.2 病毒miRNA研究进展 | 第27-28页 |
| 1.2.3 RNA病毒也能编码miRNA | 第28页 |
| 1.3 BmCPV与家蚕的互作 | 第28-29页 |
| 1.4 细胞凋亡 | 第29-30页 |
| 1.4.1 细胞凋亡概述 | 第29页 |
| 1.4.2 细胞凋亡生物学意义 | 第29-30页 |
| 1.5 本课题研究目的及意义 | 第30页 |
| 1.6 本课题主要研究内容与研究方法 | 第30-32页 |
| 1.6.1 主要研究内容 | 第30-31页 |
| 1.6.2 实验技术路线 | 第31-32页 |
| 第2章 BmCPV-miR-1及靶基因BmIAP在家蚕中肠的表达分析 | 第32-42页 |
| 2.1 引言 | 第32页 |
| 2.2 实验材料与试剂 | 第32-34页 |
| 2.2.1 主要实验材料及试剂 | 第32-33页 |
| 2.2.2 主要实验仪器 | 第33页 |
| 2.2.3 主要试剂的配置 | 第33-34页 |
| 2.3 实验方法 | 第34-38页 |
| 2.3.1 病毒接种 | 第34页 |
| 2.3.2 组织收集 | 第34页 |
| 2.3.3 测序和靶基因预测 | 第34-35页 |
| 2.3.4 RNA的提取 | 第35-36页 |
| 2.3.5 cDNA的合成 | 第36页 |
| 2.3.6 茎环RT-PCR验证 | 第36-38页 |
| 2.3.7 实时荧光定量PCR检测BmCPV-miR-1及BmIAP基因表达变化 | 第38页 |
| 2.4 结果与分析 | 第38-40页 |
| 2.4.1 测序及茎环RT-PCR结果 | 第38-39页 |
| 2.4.2 BmCPV-miR-1靶基因预测 | 第39页 |
| 2.4.3 感染BmCPV后家蚕中肠内BmCPV-miR-1和BmIAP基因表达变化 | 第39-40页 |
| 2.5 本章讨论 | 第40-42页 |
| 第3章 BmCPV-miR-1对BmIAP在细胞水平的表达调控 | 第42-53页 |
| 3.1 引言 | 第42页 |
| 3.2 实验材料与试剂 | 第42-43页 |
| 3.2.1 主要材料 | 第42页 |
| 3.2.2 主要试剂 | 第42-43页 |
| 3.2.3 主要实验仪器设备 | 第43页 |
| 3.3 实验方法 | 第43-49页 |
| 3.3.1 E.coliTop10感受态细胞的制备 | 第43页 |
| 3.3.2 质粒抽提 | 第43-44页 |
| 3.3.3 慢病毒表达载体构建 | 第44-46页 |
| 3.3.3.1 靶基因BmIAP表达载体构建 | 第44-45页 |
| 3.3.3.2 pLKO.3G-miR-1表达载体构建 | 第45-46页 |
| 3.3.4 细胞培养 | 第46-47页 |
| 3.3.5 慢病毒表达系统验证BmCPV-miR-1对靶基因BmIAP的调控作用 | 第47-48页 |
| 3.3.6 mimics在BmN细胞对靶基因BmIAP的调控验证 | 第48-49页 |
| 3.4 结果与分析 | 第49-51页 |
| 3.4.1 慢病毒表达载体构建与细胞转染 | 第49-50页 |
| 3.4.2 慢病毒表达系统验证BmCPV-miR-1对BmIAP基因的表达调控 | 第50页 |
| 3.4.3 BmCPV-miR-1mimics在BmN细胞中对BmIAP基因表达调控的验证 | 第50-51页 |
| 3.5 本章讨论 | 第51-53页 |
| 第4章 BmCPV-miR-1对BmIAP在蚕体水平的表达调控 | 第53-59页 |
| 4.1 引言 | 第53页 |
| 4.2 材料与试剂 | 第53页 |
| 4.2.1 主要实验材料与试剂 | 第53页 |
| 4.2.2 主要实验仪器与设备 | 第53页 |
| 4.3 实验方法 | 第53-55页 |
| 4.3.1 BmCPV-miR-1mimics注射家蚕 | 第53-54页 |
| 4.3.2 BmCPV-miR-1mimics、inhibitors和NC注射感染BmCPV的家蚕 | 第54页 |
| 4.3.3 组织收集 | 第54页 |
| 4.3.4 RNA提取 | 第54-55页 |
| 4.3.5 cDNA的合成 | 第55页 |
| 4.3.6 实时荧光定量PCR检测基因表达变化 | 第55页 |
| 4.4 结果分析 | 第55-57页 |
| 4.4.1 BmCPV-miR-1mimic对家蚕中肠和脂肪体内BmIAP基因表达的调控作用 | 第55-56页 |
| 4.4.2 BmCPV-miR-1mimic和inhibitor在家蚕中肠对BmCPV复制的调控作用 | 第56-57页 |
| 4.5 本章讨论 | 第57-59页 |
| 结论 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-65页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第65-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
