| 致谢 | 第6-8页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 引言 | 第15-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-45页 |
| 1. 小麦赤霉病研究进展 | 第17-43页 |
| 1.1 小麦赤霉病概况 | 第17-19页 |
| 1.2 病原菌生物学特性 | 第19页 |
| 1.3 小麦赤霉病的病害循环及其侵染过程 | 第19-23页 |
| 1.4 小麦赤霉病的防控 | 第23-27页 |
| 1.4.1 耕作制度 | 第23页 |
| 1.4.2 抗病品种 | 第23-25页 |
| 1.4.3 化学防治 | 第25-26页 |
| 1.4.4 生物防治 | 第26-27页 |
| 1.4.5 病害预测预报 | 第27页 |
| 1.5 小麦赤霉病抗药性问题 | 第27-43页 |
| 1.5.1 苯并咪唑类杀菌剂 | 第27-31页 |
| 1.5.2 麦角甾醇脱甲基抑制剂 | 第31-43页 |
| 2. 本研究的目的和意义 | 第43-45页 |
| 第二章 材料与方法 | 第45-81页 |
| 1 实验材料 | 第45页 |
| 1.1 菌株和质粒 | 第45页 |
| 1.2 供试植物 | 第45页 |
| 2 实验方法 | 第45-81页 |
| 2.1 禾谷镰刀菌的保存和培养 | 第45-46页 |
| 2.2 禾谷镰刀菌基因组DNA小量提取 | 第46页 |
| 2.3 禾谷镰刀菌基因组DNA大量提取(CTAB法) | 第46-47页 |
| 2.4 PCR技术 | 第47-48页 |
| 2.5 DNA琼脂糖凝胶电泳 | 第48-49页 |
| 2.6 PCR产物纯化 | 第49页 |
| 2.7 DNA克隆技术 | 第49-51页 |
| 2.7.1 连接与酶切反应体系 | 第49-50页 |
| 2.7.2 大肠杆菌热激转化 | 第50-51页 |
| 2.8 重组质粒的鉴定与提取 | 第51页 |
| 2.9 禾谷镰刀菌基因敲除载体的构建和敲除转化子的验证 | 第51-52页 |
| 2.10 禾谷镰刀菌基因回补载体的构建 | 第52-56页 |
| 2.10.1 融合标签蛋白载体构建 | 第52-53页 |
| 2.10.2 融合FLAG标签蛋白载体构建 | 第53-54页 |
| 2.10.3 融合GFP标签蛋白载体构建 | 第54页 |
| 2.10.4 融合GFP标签蛋白载体构建 | 第54-55页 |
| 2.10.5 酵母感受态细胞的制备 | 第55页 |
| 2.10.5 酵母质粒的提取 | 第55-56页 |
| 2.11 PEG介导的禾谷镰刀菌原生质体转化 | 第56-57页 |
| 2.11.1 准备分生孢子 | 第56页 |
| 2.11.2 制备幼殖体 | 第56页 |
| 2.11.3 制备原生质体 | 第56-57页 |
| 2.12 Southern blotting | 第57-62页 |
| 2.12.1 杂交样品的准备 | 第57页 |
| 2.12.2 DNA的酶切消化、电泳及变性 | 第57-58页 |
| 2.12.3 DNA转膜 | 第58-59页 |
| 2.12.4 DNA探针的制备 | 第59页 |
| 2.12.5 杂交 | 第59-60页 |
| 2.12.6 印迹膜的冲洗 | 第60页 |
| 2.12.7 免疫显色 | 第60-62页 |
| 2.13 RNA提取与表达量分析 | 第62-63页 |
| 2.13.1 RNA的提取及cDNA的合成 | 第62-63页 |
| 2.13.2 cDNA的合成 | 第63页 |
| 2.13.3 基因表达量分析 | 第63页 |
| 2.14 Western blot分析 | 第63-66页 |
| 2.14.1 总蛋白提取 | 第63-64页 |
| 2.14.2 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第64-65页 |
| 2.14.3 Western blot分析 | 第65-66页 |
| 2.15 亲和捕获实验 | 第66-67页 |
| 2.16 免疫共沉淀 | 第67页 |
| 2.17 禾谷镰刀菌表型测定 | 第67-71页 |
| 2.17.1 生长速率测定 | 第67页 |
| 2.17.2 禾谷镰刀菌的产孢量测定 | 第67-68页 |
| 2.17.3 禾谷镰刀菌的分生孢子萌发测定 | 第68页 |
| 2.17.4 禾谷镰刀菌对细胞胁迫压力的测定 | 第68-69页 |
| 2.17.5 禾谷镰刀菌麦穗致病性分析 | 第69-70页 |
| 2.17.6 DON毒素提取方法 | 第70页 |
| 2.17.7 DON毒素测定方法 | 第70-71页 |
| 2.17.8 禾谷镰刀菌麦角甾醇提取方法 | 第71页 |
| 2.17.9 禾谷镰刀菌麦角甾醇测定方法 | 第71页 |
| 2.18 酵母双杂交分析 | 第71-73页 |
| 2.18.1 酵母双杂载体的构建 | 第72页 |
| 2.18.2 质粒共转酵母 | 第72-73页 |
| 2.19 酵母双杂交筛库 | 第73-74页 |
| 2.20 酵母单杂交 | 第74页 |
| 2.21 双分子荧光互补实验(BiFC) | 第74-75页 |
| 2.22 酵母回补载体的构建 | 第75页 |
| 2.23 染色质免疫共沉淀(ChIP) | 第75-81页 |
| 2.23.1 ChIP实验步骤 | 第75-77页 |
| 2.23.2 ChIP常用试剂及 | 第77-79页 |
| 2.23.3 ChIP-qPCR | 第79页 |
| 2.23.4 ChIP-seq | 第79-81页 |
| 第三章 结果与分析 | 第81-116页 |
| 1. 禾谷镰刀菌中转录因子FgTeb调控DMI药剂敏感性 | 第81-96页 |
| 1.1 禾谷镰刀菌中甾醇合成调控元件同源基因敲除及表型测定 | 第81-82页 |
| 1.2 转录因子FgTeb的鉴定 | 第82-84页 |
| 1.3 FgTeb调控麦角甾醇合成以及相关基因的表达 | 第84-87页 |
| 1.4 鉴定FgTeb的靶标基因及其顺式作用元件 | 第87-91页 |
| 1.5 FgTeb参与到病原菌致病过程 | 第91-94页 |
| 1.6 小结 | 第94-96页 |
| 2 禾谷镰刀菌中微管末端结合蛋白FgEB1功能研究 | 第96-116页 |
| 2.1 FgEB1保守性分析 | 第96-97页 |
| 2.2 FgEB1调控禾谷镰刀菌菌丝极性生长 | 第97-100页 |
| 2.3 FgEB1调控微管蛋白的亚细胞定位 | 第100-101页 |
| 2.4 FgEB1影响了极性相关的肌球蛋白myosin Ⅰ的亚细胞定位 | 第101-107页 |
| 2.5 FgEB1与隔膜蛋白形成复合体调控分生孢子极性发育 | 第107-111页 |
| 2.6 禾谷镰刀菌中FgEB1-FgKar9复合体调控多菌灵药剂敏感性 | 第111-112页 |
| 2.7 FgEB1调控DON毒素产生以及病原菌致病性 | 第112-114页 |
| 2.8 小结 | 第114-116页 |
| 第四章 全文总结及展望 | 第116-119页 |
| 1. 全文总结 | 第116-117页 |
| 2. 后续工作展望 | 第117-119页 |
| 参考文献 | 第119-128页 |
| 附录 | 第128-144页 |
| 附录 A: 引物列表 | 第128-136页 |
| 附录 B: 培养基配方 | 第136-141页 |
| 附录 C: 试剂配方: | 第141-144页 |
| 附录 D: 常用试验仪器 | 第144页 |
