| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-32页 |
| 1.1 褐飞虱概况 | 第15-18页 |
| 1.1.1 褐飞虱及其危害 | 第15页 |
| 1.1.2 褐飞虱与RRSV传播 | 第15-18页 |
| 1.2 昆虫唾液蛋白研究 | 第18-24页 |
| 1.2.1 昆虫取食行为 | 第18-19页 |
| 1.2.2 唾液在昆虫取食过程中的作用 | 第19-21页 |
| 1.2.3 昆虫唾液蛋白成分分析 | 第21-23页 |
| 1.2.4 唾液与病毒传播 | 第23-24页 |
| 1.3 昆虫传播水稻病毒分子机制研究进展 | 第24-30页 |
| 1.3.1 水稻病毒的种类 | 第24-25页 |
| 1.3.2 病毒传播屏障 | 第25-27页 |
| 1.3.3 传播屏障突破策略 | 第27-28页 |
| 1.3.4 病毒侵染对介体昆虫影响 | 第28-30页 |
| 1.4 本论文研究目的及意义 | 第30-32页 |
| 第二章 三种飞虱唾液腺转录组分析 | 第32-46页 |
| 2.1 引言 | 第32页 |
| 2.2 实验材料与方法 | 第32-35页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第32-33页 |
| 2.2.1.1 昆虫种群及饲养条件 | 第32页 |
| 2.2.1.2 主要实验试剂与工具 | 第32-33页 |
| 2.2.2 实验方法 | 第33-35页 |
| 2.2.2.1 唾液腺解剖与样品收集 | 第33页 |
| 2.2.2.2 唾液腺总RNA提取 | 第33页 |
| 2.2.2.2 cDNA测序文库构建和Illumina转录组测序 | 第33页 |
| 2.2.2.3 基因功能注释和蛋白预测 | 第33-34页 |
| 2.2.2.4 BLAST score ratio(BSR)分析 | 第34页 |
| 2.2.2.5 三种飞虱基因家族比较分析 | 第34-35页 |
| 2.2.2.6 唾液腺高表达基因的物种间比较 | 第35页 |
| 2.3 结果与分析 | 第35-42页 |
| 2.3.1 Illumina测序以及序列组装 | 第35页 |
| 2.3.2 序列注释和蛋白预测 | 第35-38页 |
| 2.3.3 COG分析 | 第38页 |
| 2.3.4 BSR分析 | 第38-39页 |
| 2.3.5 部分基因家族比较分析 | 第39-41页 |
| 2.3.6 唾液腺高表达基因物种间比较 | 第41-42页 |
| 2.4 讨论 | 第42-46页 |
| 第三章 褐飞虱唾液组分及功能研究 | 第46-75页 |
| 3.1 引言 | 第46-47页 |
| 3.2 材料与方法 | 第47-56页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第47-48页 |
| 3.2.1.1 昆虫种群及饲养条件 | 第47页 |
| 3.2.1.2 主要实验试剂与工具 | 第47-48页 |
| 3.2.2 实验方法 | 第48-56页 |
| 3.2.2.1 水状唾液收集与浓缩 | 第48页 |
| 3.2.2.2 蛋白样品溶液内酶解 | 第48-49页 |
| 3.2.2.3 LC-MS/MS测定水状唾液蛋白组分 | 第49页 |
| 3.2.2.4 胶状唾液收集 | 第49-50页 |
| 3.2.2.5 LC-MS/MS测定胶状唾液蛋白组分 | 第50页 |
| 3.2.2.6 生物信息学分析 | 第50-51页 |
| 3.2.2.7 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及银染 | 第51页 |
| 3.2.2.8 褐飞虱总RNA提取 | 第51页 |
| 3.2.2.9 总RNA反转录 | 第51页 |
| 3.2.2.10 荧光定量PCR (RT-qPCR) | 第51-54页 |
| 3.2.2.11 dsRNA合成 | 第54页 |
| 3.2.2.12 显微注射 | 第54-55页 |
| 3.2.2.13 电子刺探记录(EPG) | 第55页 |
| 3.2.2.14 蜜露收集测定 | 第55页 |
| 3.2.2.15 pH检测 | 第55-56页 |
| 3.2.2.16 SEM | 第56页 |
| 3.2.2.17 进化树构建 | 第56页 |
| 3.3 结果与分析 | 第56-68页 |
| 3.3.1 褐飞虱水状唾液和胶状唾液蛋白鉴定 | 第56-60页 |
| 3.3.2 唾液蛋白组织特异性分析 | 第60-61页 |
| 3.3.3 唾液蛋白抑制对褐飞虱表型的影响 | 第61-65页 |
| 3.3.4 唾液蛋白基因沉默对取食行为影响 | 第65页 |
| 3.3.5 唾液蛋白基因沉默对蜜露分泌影响 | 第65-67页 |
| 3.3.6 CA沉默对褐飞虱pH影响 | 第67-68页 |
| 3.4 讨论 | 第68-75页 |
| 第四章 褐飞虱唾液鞘蛋白salivap-4功能研究 | 第75-93页 |
| 4.1 引言 | 第75页 |
| 4.2 材料与方法 | 第75-78页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第75-76页 |
| 4.2.1.1 昆虫种群及饲养条件 | 第75页 |
| 4.2.1.2 主要实验试剂与工具 | 第75-76页 |
| 4.2.2 实验方法 | 第76-78页 |
| 4.2.2.1 RNA提取、反转录及RT-qPCR | 第76页 |
| 4.2.2.2 免疫组化 | 第76页 |
| 4.2.2.3 RNA干扰 | 第76-77页 |
| 4.2.2.4 EPG | 第77页 |
| 4.2.2.5 Westernblotting | 第77页 |
| 4.2.2.6 SEM | 第77-78页 |
| 4.3 实验结果与分析 | 第78-90页 |
| 4.3.1 salivap-4序列分析 | 第78页 |
| 4.3.2 salivap-4表达模式与定位 | 第78-82页 |
| 4.3.3 salivap-4抑制对褐飞虱在水稻上的影响 | 第82-85页 |
| 4.3.4 salivap-4抑制对褐飞虱在人工饲料上的影响 | 第85-86页 |
| 4.3.5 salivap-4抑制对褐飞虱取食的影响 | 第86-90页 |
| 4.3.6 salivap-4抑制后褐飞虱取食痕迹观察 | 第90页 |
| 4.4 讨论 | 第90-93页 |
| 第五章 褐飞虱唾液蛋白mucin-like protein与植物抗性 | 第93-106页 |
| 5.1 引言 | 第93页 |
| 5.2 材料与方法 | 第93-96页 |
| 5.2.1 实验材料 | 第93-94页 |
| 5.2.1.1 昆虫种群及饲养条件 | 第93-94页 |
| 5.2.1.2 主要实验试剂与工具 | 第94页 |
| 5.2.2 实验方法 | 第94-96页 |
| 5.2.2.1 RNA提取、反转录及RT-qPCR | 第94页 |
| 5.2.2.2 原位杂交 | 第94-95页 |
| 5.2.2.3 RNA干扰 | 第95-96页 |
| 5.2.2.4 免疫组化 | 第96页 |
| 5.2.2.5 SEM | 第96页 |
| 5.2.2.6 生物信息学分析 | 第96页 |
| 5.3 实验结果与分析 | 第96-104页 |
| 5.3.1 NlMul序列分析 | 第96-97页 |
| 5.3.2 NlMul表达模式分析 | 第97-99页 |
| 5.3.3 NlMul干扰 | 第99-104页 |
| 5.4 讨论 | 第104-106页 |
| 第六章 水稻齿叶矮缩病毒(RRSV)诱导褐飞虱唾液腺细胞凋亡帮助病毒传播 | 第106-124页 |
| 6.1 引言 | 第106-107页 |
| 6.2 材料与方法 | 第107-111页 |
| 6.2.1 实验材料 | 第107-108页 |
| 6.2.1.1 昆虫种群及饲养条件 | 第107页 |
| 6.2.1.2 RRSV水稻病株 | 第107页 |
| 5.2.1.3 褐飞虱获毒 | 第107页 |
| 6.2.1.4 主要实验试剂与工具 | 第107-108页 |
| 6.2.2 实验方法 | 第108-111页 |
| 6.2.2.1 细胞凋亡检测与免疫组化共染 | 第108页 |
| 6.2.2.2 免疫组化标记RRSV | 第108-109页 |
| 6.2.2.3 RNA提取、反转录及RT-qPCR | 第109页 |
| 6.2.2.4 dsRNA合成及显微注射 | 第109-110页 |
| 6.2.2.5 褐飞虱传毒 | 第110页 |
| 6.2.2.6 透射电子显微镜(TEM) | 第110页 |
| 6.2.2.6 免疫电子显微镜(IEM) | 第110-111页 |
| 6.2.2.7 Western blotting | 第111页 |
| 6.3 结果与分析 | 第111-121页 |
| 6.3.1 RRSV在褐飞虱唾液腺的增长动态 | 第111页 |
| 6.3.2 RRSV诱导褐飞虱唾液腺细胞凋亡 | 第111-115页 |
| 6.3.3 激活感毒褐飞虱细胞凋亡的分子机理 | 第115-119页 |
| 6.3.4 细胞凋亡对RRSV水平传播的影响 | 第119-121页 |
| 6.4 讨论 | 第121-124页 |
| 第七章 RRSV与褐飞虱唾液腺线粒体蛋白互作 | 第124-137页 |
| 7.1 引言 | 第124-125页 |
| 7.2 材料与方法 | 第125-128页 |
| 7.2.1 实验材料 | 第125-126页 |
| 7.2.1.1 昆虫种群及病毒 | 第125页 |
| 7.2.1.2 酵母双杂交菌株 | 第125页 |
| 7.2.1.3 GST-Pull down菌株 | 第125页 |
| 7.2.1.4 抗体 | 第125页 |
| 7.2.1.5 主要实验试剂与工具 | 第125-126页 |
| 7.2.2 实验方法 | 第126-128页 |
| 7.2.2.1 酵母双杂交 | 第126页 |
| 7.2.2.2 GST-Pull down | 第126页 |
| 7.2.2.3 RRSV与OSCP共染 | 第126-127页 |
| 7.2.2.3 RRSV与线粒体共染 | 第127页 |
| 7.2.2.3 RNA提取、反转录及RT-qPCR | 第127页 |
| 7.2.2.4 dsRNA合成及显微注射 | 第127-128页 |
| 7.2.2.5 TEM | 第128页 |
| 7.2.2.6 Western blotting | 第128页 |
| 7.3 结果与分析 | 第128-135页 |
| 7.3.1 RRSV Pns10筛选褐飞虱唾液腺酵母文库 | 第128-129页 |
| 7.3.2 GST-Pull down验证 | 第129-130页 |
| 7.3.3 NlOSCP与Pns10在褐飞虱唾液腺细胞内互作 | 第130-134页 |
| 7.3.4 NlOSCP与Pns10互作的功能研究 | 第134-135页 |
| 7.4 讨论 | 第135-137页 |
| 第八章 总结与讨论 | 第137-140页 |
| 8.1 全文总结与讨论 | 第137-138页 |
| 8.2 进一步研究方向 | 第138-139页 |
| 8.3 本研究创新点 | 第139-140页 |
| 参考文献 | 第140-159页 |
| 作者简介 | 第159-161页 |
| 致谢 | 第161-162页 |
