中文摘要 | 第8-10页 |
Abstract | 第10-11页 |
第一部分:胰岛再生源蛋白Reg3α在STZ诱导的糖尿病大鼠胰腺组织中的表达定位研究 | 第12-63页 |
前言 | 第12-16页 |
材料与方法 | 第16-44页 |
1 实验材料 | 第16-20页 |
2 实验方法 | 第20-44页 |
2.1 小鼠胰岛分离、培养及脂肪酸诱导损伤 | 第20-22页 |
2.2 糖尿病动物模型的建立 | 第22-24页 |
2.3 大鼠胰腺组织石蜡切片形态学分析 | 第24-30页 |
2.4 组织总RNA提取和Real-time RT-PCR实验 | 第30-32页 |
2.5 大鼠组织基因表达谱芯片 | 第32-33页 |
2.6 组织蛋白的提取和分析 | 第33-36页 |
2.7 荧光素酶报告基因实验 | 第36-43页 |
2.8 数据处理与统计学分析 | 第43-44页 |
结果 | 第44-52页 |
1 Reg3α在棕榈酸诱导损伤的小鼠胰岛中显著性高表达 | 第44-45页 |
2 STZ诱导大鼠1型糖尿病模型的建立 | 第45-46页 |
3 Reg3α在模型组大鼠胰腺组织中显著性高表达 | 第46-48页 |
4 Reg3α在模型组大鼠胰岛内与胰高血糖素(Glucagon)共定位 | 第48-50页 |
5 IL-6对Reg3α转录活性的影响 | 第50-52页 |
分析与讨论 | 第52-56页 |
参考文献 | 第56-62页 |
结论与展望 | 第62-63页 |
第二部分:胰岛再生源蛋白Reg3α在炎症细胞因子诱导损伤的胰岛β细胞中的功能和机制研究 | 第63-107页 |
前言 | 第63-67页 |
材料与方法 | 第67-81页 |
1 实验材料 | 第67-68页 |
2 实验方法 | 第68-81页 |
2.1 质粒的制备和瞬时转染 | 第68页 |
2.2 腺病毒表达载体的构建和感染 | 第68-75页 |
2.3 细胞培养及炎症细胞因子诱导损伤 | 第75页 |
2.4 小鼠胰岛分离、培养及炎症细胞因子诱导损伤 | 第75-76页 |
2.5 MTT细胞增殖实验 | 第76页 |
2.6 流式细胞术 | 第76-77页 |
2.7 Annexin V/PI细胞凋亡染色 | 第77页 |
2.8 总RNA提取和Real-time RT-PCR实验 | 第77页 |
2.9 细胞蛋白的提取和分析 | 第77-78页 |
2.10 葡萄糖刺激的胰岛素分泌(GSIS)实验 | 第78-79页 |
2.11 胰岛的TUNEL染色 | 第79-80页 |
2.12 统计学分析 | 第80-81页 |
结果 | 第81-94页 |
1 质粒载体pCDNA3.1(-)-mReg3α表达效率鉴定 | 第81-82页 |
2 腺病毒载体pYr-ads-4-mReg3α表达效率鉴定 | 第82-85页 |
3 Reg3α过表达抑制炎症细胞因子诱导的INS-1细胞凋亡 | 第85-89页 |
4 Reg3α过表达抑制炎症细胞因子诱导的INS-1细胞内p38 MAPKs的磷酸化 | 第89-90页 |
5 Reg3α过表达抑制炎症细胞因子诱导的胰岛细胞凋亡 | 第90-91页 |
6 Reg3α过表达抑制炎症细胞因子诱导的胰岛功能损伤 | 第91-94页 |
分析与讨论 | 第94-97页 |
参考文献 | 第97-106页 |
结论与展望 | 第106-107页 |
第三部分:胰岛再生源蛋白Reg3α对小鼠同系胰岛移植物保护作用的研究 | 第107-143页 |
前言 | 第107-111页 |
材料与方法 | 第111-119页 |
1 实验材料 | 第111页 |
2 实验方法 | 第111-119页 |
2.1 胰岛的体外分离、培养和病毒感染 | 第111-112页 |
2.2 同系BALB/c小鼠肾被膜下胰岛移植术 | 第112-113页 |
2.3 腹腔葡萄糖耐量实验(IPGTT)及血清胰岛素检测 | 第113页 |
2.4 胰岛移植物的形态学分析 | 第113-118页 |
2.5 统计学分析 | 第118-119页 |
结果 | 第119-129页 |
1 Reg3α过表达对同系BALB/c小鼠胰岛移植后的血糖调控作用 | 第119-124页 |
2 形态学分析Reg3α过表达对同系BALB/c小鼠胰岛移植物的保护作用 | 第124-129页 |
分析与讨论 | 第129-133页 |
参考文献 | 第133-142页 |
结论与展望 | 第142-143页 |
综述:移植物中免疫应答在改善胰岛移植中的重要作用 | 第143-161页 |
摘要 | 第143页 |
前言 | 第143-145页 |
1 提高供体移植胰岛存活率及长期功能 | 第145-148页 |
1.1 利用生物材料支架改善胰岛移植 | 第146-147页 |
1.2 为移植胰岛提供营养因子改善胰岛移植 | 第147-148页 |
2 干预胰岛移植中的免疫调节过程改善胰岛移植 | 第148-152页 |
2.1 基于细胞学方法抑制免疫应答 | 第149-151页 |
2.2 对免疫细胞重编程,促进免疫抑制细胞增殖抑制免疫应答 | 第151-152页 |
3 多种方法联用改善移植效果 | 第152-153页 |
参考文献 | 第153-161页 |
附录 | 第161-172页 |
附录1, 抗体信息 | 第161-163页 |
附录2, 引物序列 | 第163-164页 |
附录3, 基因序列 | 第164-168页 |
附录4, pGL3-Basic质粒载体图谱 | 第168页 |
附录5, pCDNA3.1(-)-mReg3α质粒图谱 | 第168-169页 |
附录6, 穿梭质粒构建PCR产物琼脂糖电泳 | 第169页 |
附录7, 双酶切鉴定结果 | 第169-170页 |
附录8, 测序报告 | 第170-171页 |
附录9, 单酶切鉴定结果 | 第171-172页 |
攻读学位期间发表文章 | 第172-173页 |
致谢 | 第173页 |