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胰岛再生源蛋白Reg3α改善胰岛移植预后的分子机制研究

中文摘要第8-10页
Abstract第10-11页
第一部分:胰岛再生源蛋白Reg3α在STZ诱导的糖尿病大鼠胰腺组织中的表达定位研究第12-63页
    前言第12-16页
    材料与方法第16-44页
        1 实验材料第16-20页
        2 实验方法第20-44页
            2.1 小鼠胰岛分离、培养及脂肪酸诱导损伤第20-22页
            2.2 糖尿病动物模型的建立第22-24页
            2.3 大鼠胰腺组织石蜡切片形态学分析第24-30页
            2.4 组织总RNA提取和Real-time RT-PCR实验第30-32页
            2.5 大鼠组织基因表达谱芯片第32-33页
            2.6 组织蛋白的提取和分析第33-36页
            2.7 荧光素酶报告基因实验第36-43页
            2.8 数据处理与统计学分析第43-44页
    结果第44-52页
        1 Reg3α在棕榈酸诱导损伤的小鼠胰岛中显著性高表达第44-45页
        2 STZ诱导大鼠1型糖尿病模型的建立第45-46页
        3 Reg3α在模型组大鼠胰腺组织中显著性高表达第46-48页
        4 Reg3α在模型组大鼠胰岛内与胰高血糖素(Glucagon)共定位第48-50页
        5 IL-6对Reg3α转录活性的影响第50-52页
    分析与讨论第52-56页
    参考文献第56-62页
    结论与展望第62-63页
第二部分:胰岛再生源蛋白Reg3α在炎症细胞因子诱导损伤的胰岛β细胞中的功能和机制研究第63-107页
    前言第63-67页
    材料与方法第67-81页
        1 实验材料第67-68页
        2 实验方法第68-81页
            2.1 质粒的制备和瞬时转染第68页
            2.2 腺病毒表达载体的构建和感染第68-75页
            2.3 细胞培养及炎症细胞因子诱导损伤第75页
            2.4 小鼠胰岛分离、培养及炎症细胞因子诱导损伤第75-76页
            2.5 MTT细胞增殖实验第76页
            2.6 流式细胞术第76-77页
            2.7 Annexin V/PI细胞凋亡染色第77页
            2.8 总RNA提取和Real-time RT-PCR实验第77页
            2.9 细胞蛋白的提取和分析第77-78页
            2.10 葡萄糖刺激的胰岛素分泌(GSIS)实验第78-79页
            2.11 胰岛的TUNEL染色第79-80页
            2.12 统计学分析第80-81页
    结果第81-94页
        1 质粒载体pCDNA3.1(-)-mReg3α表达效率鉴定第81-82页
        2 腺病毒载体pYr-ads-4-mReg3α表达效率鉴定第82-85页
        3 Reg3α过表达抑制炎症细胞因子诱导的INS-1细胞凋亡第85-89页
        4 Reg3α过表达抑制炎症细胞因子诱导的INS-1细胞内p38 MAPKs的磷酸化第89-90页
        5 Reg3α过表达抑制炎症细胞因子诱导的胰岛细胞凋亡第90-91页
        6 Reg3α过表达抑制炎症细胞因子诱导的胰岛功能损伤第91-94页
    分析与讨论第94-97页
    参考文献第97-106页
    结论与展望第106-107页
第三部分:胰岛再生源蛋白Reg3α对小鼠同系胰岛移植物保护作用的研究第107-143页
    前言第107-111页
    材料与方法第111-119页
        1 实验材料第111页
        2 实验方法第111-119页
            2.1 胰岛的体外分离、培养和病毒感染第111-112页
            2.2 同系BALB/c小鼠肾被膜下胰岛移植术第112-113页
            2.3 腹腔葡萄糖耐量实验(IPGTT)及血清胰岛素检测第113页
            2.4 胰岛移植物的形态学分析第113-118页
            2.5 统计学分析第118-119页
    结果第119-129页
        1 Reg3α过表达对同系BALB/c小鼠胰岛移植后的血糖调控作用第119-124页
        2 形态学分析Reg3α过表达对同系BALB/c小鼠胰岛移植物的保护作用第124-129页
    分析与讨论第129-133页
    参考文献第133-142页
    结论与展望第142-143页
综述:移植物中免疫应答在改善胰岛移植中的重要作用第143-161页
    摘要第143页
    前言第143-145页
    1 提高供体移植胰岛存活率及长期功能第145-148页
        1.1 利用生物材料支架改善胰岛移植第146-147页
        1.2 为移植胰岛提供营养因子改善胰岛移植第147-148页
    2 干预胰岛移植中的免疫调节过程改善胰岛移植第148-152页
        2.1 基于细胞学方法抑制免疫应答第149-151页
        2.2 对免疫细胞重编程,促进免疫抑制细胞增殖抑制免疫应答第151-152页
    3 多种方法联用改善移植效果第152-153页
    参考文献第153-161页
附录第161-172页
    附录1, 抗体信息第161-163页
    附录2, 引物序列第163-164页
    附录3, 基因序列第164-168页
    附录4, pGL3-Basic质粒载体图谱第168页
    附录5, pCDNA3.1(-)-mReg3α质粒图谱第168-169页
    附录6, 穿梭质粒构建PCR产物琼脂糖电泳第169页
    附录7, 双酶切鉴定结果第169-170页
    附录8, 测序报告第170-171页
    附录9, 单酶切鉴定结果第171-172页
攻读学位期间发表文章第172-173页
致谢第173页

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