论文摘要 | 第6-7页 |
ABSTRACT | 第7页 |
第一章 研究背景及文献综述 | 第11-23页 |
第一节 泛素连接酶SCF~(FBW7) | 第11-15页 |
1. 泛素蛋白酶体系统(UPS) | 第11页 |
2. E3泛素连接酶FBW7 | 第11-12页 |
3. FBW7下游的底物 | 第12-13页 |
4. FBW7调控的研究及进展 | 第13-15页 |
第二节 转录因子FoxM1 | 第15-18页 |
1. FoxM1蛋白简介 | 第15页 |
2. Cell Cycle和FoxM1 | 第15-16页 |
3. FoxM1和肿瘤 | 第16-17页 |
4. FoxM1跟肿瘤相关的信号通路 | 第17-18页 |
5. FoxM1研究进展 | 第18页 |
第三节 甲基转移酶G9a | 第18-23页 |
1. G9a的结构及活性 | 第18-20页 |
2. G9a在细胞增殖、衰老及肿瘤中的作用 | 第20-21页 |
3. G9a研究展望 | 第21-23页 |
第二章 实验材料与实验方法 | 第23-47页 |
第一节 实验材料 | 第23-24页 |
1. 实验所用质粒 | 第23页 |
2. 实验所用细胞系 | 第23页 |
3. 实验所用器材 | 第23-24页 |
第二节 实验试剂 | 第24-34页 |
1. 常用试剂 | 第24-25页 |
2. PCR引物 | 第25页 |
3. RT-PCR引物 | 第25页 |
4. siRNA序列 | 第25页 |
5. 试剂配制方法 | 第25-34页 |
第三节 实验仪器 | 第34页 |
第四节 实验方法 | 第34-47页 |
1. FBW7底物预测 | 第34-35页 |
2. 克隆构建 | 第35-38页 |
3. 细胞体外培养、传代及铺板 | 第38-39页 |
4. 转染 | 第39-41页 |
5. 蛋白质免疫印迹(Western-blot) | 第41-43页 |
6. 蛋白质免疫共沉淀(Co-IP) | 第43-44页 |
7. 利用放线菌酮检测蛋白质半衰期 | 第44页 |
8. 免疫荧光实验检测蛋白在细胞内的共定位 | 第44-45页 |
9. 细胞周期同步化 | 第45-47页 |
第三章 实验结果与分析 | 第47-65页 |
第一部分 FBW7对FoxM1稳定性调控的研究 | 第47-55页 |
第一节、FBW7对FoxM1蛋白稳定性的调控 | 第47-51页 |
第二节、FBW7与FoxM1之间的相互作用 | 第51-53页 |
第三节、FBW7对FoxM1稳定性的调控跟细胞周期的关系 | 第53-55页 |
第二部分 FBW7对G9a稳定性调控的研究 | 第55-63页 |
第一节、FBW7对G9a蛋白稳定性的调控 | 第55-59页 |
第二节、FBW7与G9a之间的相互作用 | 第59-62页 |
第三节、FBW7对G9a甲基化活性的影响 | 第62-63页 |
第三部分 FBW7新底物的研究 | 第63-65页 |
第一节、生物信息学方法预测FBW7新底物 | 第63-64页 |
第二节、蛋白质质谱法(LC-MS)预测FBW7新底物 | 第64-65页 |
第四章 论文总结与讨论 | 第65-69页 |
一、FBW7对FoxM1蛋白稳定性的调控 | 第65页 |
二、FBW7和FoxM1相互作用关系的研究 | 第65-66页 |
三、FBW7对FoxM1稳定性的调控跟细胞周期的关系 | 第66-67页 |
四、FBW7对G9a蛋白稳定性的调控 | 第67页 |
五、FBW7和G9a相互作用关系研究 | 第67页 |
六、FBW7对G9a甲基化活性的影响 | 第67-68页 |
七、FBW7新底物的找寻 | 第68-69页 |
参考文献 | 第69-77页 |
附录 | 第77-82页 |
缩略词表 | 第82-83页 |
致谢 | 第83-84页 |