| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 第1章 绪论 | 第13-31页 |
| 1.1 课题来源及背景 | 第13页 |
| 1.2 黄曲霉毒素研究现状 | 第13-19页 |
| 1.2.1 黄曲霉毒素结构及理化性质 | 第14页 |
| 1.2.2 黄曲霉毒素的合成机制 | 第14-15页 |
| 1.2.3 黄曲霉毒素的危害 | 第15-16页 |
| 1.2.4 黄曲霉毒素污染影响因素 | 第16-17页 |
| 1.2.5 黄曲霉毒素污染控制与去除措施 | 第17-19页 |
| 1.3 花生中黄曲霉毒素的污染现状及防治措施 | 第19-29页 |
| 1.3.1 花生中黄曲霉毒素污染现状 | 第19-20页 |
| 1.3.2 花生中黄曲霉毒素污染的相关因素 | 第20页 |
| 1.3.3 花生抗黄曲霉毒素污染的研究进展 | 第20-22页 |
| 1.3.4 花生抗黄曲霉毒毒素污染机制的研究 | 第22-29页 |
| 1.4 iso-ARah3 基因的相关研究 | 第29页 |
| 1.5 课题目的及意义 | 第29-31页 |
| 第2章 花生 iso-ARah3 基因的表达特性分析 | 第31-46页 |
| 2.1 实验材料 | 第31-32页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第31页 |
| 2.1.2 菌种 | 第31页 |
| 2.1.3 常用试剂及培养基 | 第31-32页 |
| 2.1.4 实验仪器 | 第32页 |
| 2.2 实验方法 | 第32-36页 |
| 2.2.1 花生种子发育过程及花生各组织材料的准备 | 第32页 |
| 2.2.2 干旱胁迫处理 | 第32-33页 |
| 2.2.3 干旱及黄曲霉胁迫处理 | 第33页 |
| 2.2.4 病害胁迫处理 | 第33页 |
| 2.2.5 RNA 的提取 | 第33-34页 |
| 2.2.6 cDNA 的合成 | 第34-35页 |
| 2.2.7 实时荧光定量 PCR 引物设计 | 第35页 |
| 2.2.8 实时荧光定量 PCR 分析 | 第35-36页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第36-44页 |
| 2.3.1 总 RNA 及 cDNA 的凝胶检测 | 第36-37页 |
| 2.3.2 基因芯片杂交及信号数据分析 | 第37-40页 |
| 2.3.3 实时荧光定量 PCR 反应产物的溶解曲线分析 | 第40-41页 |
| 2.3.4 iso-ARah3 基因的定量 PCR 验证 | 第41-42页 |
| 2.3.5 iso-ARah3 基因时空表达特性分析 | 第42-44页 |
| 2.4 本章小结 | 第44-46页 |
| 第3章 花生 iso-ARah3 基因克隆及蛋白表达 | 第46-68页 |
| 3.1 实验材料 | 第46-47页 |
| 3.1.1 菌种 | 第46页 |
| 3.1.2 常用试剂 | 第46页 |
| 3.1.3 常用培养基及试剂的配置 | 第46-47页 |
| 3.1.4 实验仪器 | 第47页 |
| 3.2 实验方法 | 第47-56页 |
| 3.2.1 iso-ARah3 基因的扩增及 T-A 克隆 | 第47-50页 |
| 3.2.2 生物信息学分析的软件及网站 | 第50-51页 |
| 3.2.3 iso-ARah3 基因的原核表达 | 第51-53页 |
| 3.2.4 iso-ARah3 重组蛋白的诱导及纯化 | 第53-54页 |
| 3.2.5 原核表达蛋白抗黄曲霉活性分析 | 第54-55页 |
| 3.2.6 抗体的制备和检测 | 第55-56页 |
| 3.2.7 iso-ARah3 蛋白的组织表达分析 | 第56页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第56-67页 |
| 3.3.1 iso-ARah3 基因 T-A 阳性克隆筛选结果 | 第56-57页 |
| 3.3.2 iso-ARah3 基因生物信息学分析结果 | 第57-61页 |
| 3.3.3 pET28a-isoARah3 表达载体的验证 | 第61页 |
| 3.3.4 重组 pET28a-isoARah3 在大肠杆菌 BL21 中表达与纯化 | 第61-62页 |
| 3.3.5 重组蛋白的抑菌性分析 | 第62-64页 |
| 3.3.6 含 iso-ARah3 基因抗体的检测 | 第64-66页 |
| 3.3.7 WesternBlot 检测 iso-ARah3 蛋白的组织表达 | 第66-67页 |
| 3.4 本章小结 | 第67-68页 |
| 第4章 花生 iso-ARah3 基因的植物超表达 | 第68-76页 |
| 4.1 实验材料 | 第68-69页 |
| 4.1.1 常用试剂 | 第68页 |
| 4.1.2 常用培养基及其配制 | 第68-69页 |
| 4.2 实验方法 | 第69-72页 |
| 4.2.1 植物表达载体的构建 | 第69-71页 |
| 4.2.2 农杆菌介导 iso-ARah3 基因的遗传转化 | 第71页 |
| 4.2.3 转基因植株的检测 | 第71-72页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第72-75页 |
| 4.3.1 植物表达载体的构建 | 第72-74页 |
| 4.3.2 花生 iso-ARah3 基因的遗传转化流程 | 第74-75页 |
| 4.3.3 转基因花生植株的鉴定 | 第75页 |
| 4.4 本章小结 | 第75-76页 |
| 第5章 花生 iso-ARah3 基因启动子的克隆 | 第76-81页 |
| 5.1 实验材料 | 第76页 |
| 5.1.1 植物材料 | 第76页 |
| 5.1.2 试剂 | 第76页 |
| 5.2 实验方法 | 第76-78页 |
| 5.2.1 启动子引物设计 | 第76-77页 |
| 5.2.2 花生幼叶 DNA 的提取 | 第77页 |
| 5.2.3 iso-ARah3 基因上游序列的克隆 | 第77页 |
| 5.2.4 启动子序列预测软件 | 第77-78页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第78-80页 |
| 5.3.1 花生幼叶 DNA 电泳结果 | 第78页 |
| 5.3.2 iso-ARah3 基因启动子的克隆 | 第78-79页 |
| 5.3.3 iso-ARah3 基因启动子序列分析 | 第79-80页 |
| 5.4 本章小结 | 第80-81页 |
| 结论 | 第81-83页 |
| 参考文献 | 第83-94页 |
| 致谢 | 第94页 |
