| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 1 前言 | 第11-16页 |
| 2 材料和方法 | 第16-27页 |
| 2.1 实验鱼 | 第16页 |
| 2.2 实验主要试剂及其配制方法 | 第16-18页 |
| 2.2.1 试剂 | 第16页 |
| 2.2.2 主要试剂配制 | 第16-17页 |
| 2.2.3 菌株和质粒 | 第17-18页 |
| 2.2.4 实验用试剂盒 | 第18页 |
| 2.3 实验主要仪器和设备 | 第18-19页 |
| 2.4 实验方法 | 第19-27页 |
| 2.4.1 Sox9b-TALENs敲除载体构建 | 第19页 |
| 2.4.2 体外合成mRNA | 第19页 |
| 2.4.3 胚胎显微注射 | 第19-20页 |
| 2.4.4 Sox9b基因敲除家系建立 | 第20-22页 |
| 2.4.5 连接和转化 | 第22页 |
| 2.4.6 Total RNA提取 | 第22-23页 |
| 2.4.7 逆转录合成cDNA | 第23页 |
| 2.4.8 普通PCR、半定量PCR和荧光定量PCR | 第23-24页 |
| 2.4.9 石蜡切片和HE染色 | 第24-25页 |
| 2.4.10 感受态制备 | 第25-26页 |
| 2.4.11 数据分析 | 第26-27页 |
| 3 结果 | 第27-41页 |
| 3.1 青鳉中Sox9b-TALENs介导基因敲除 | 第27-31页 |
| 3.1.1 Sox9b敲除位点预测 | 第27页 |
| 3.1.2 TALENs组装 | 第27-29页 |
| 3.1.3 TALENs敲除序列检测 | 第29页 |
| 3.1.4 Sox9b敲除后蛋白预测 | 第29-31页 |
| 3.2 Sox9b突变家系建立、杂合子和纯合子筛选 | 第31-32页 |
| 3.2.1 突变家系建立 | 第31页 |
| 3.2.2 纯合子筛选 | 第31-32页 |
| 3.3 表型分析 | 第32-36页 |
| 3.3.1 形态学分析 | 第32-34页 |
| 3.3.2 组织学指数分析 | 第34页 |
| 3.3.3 生殖力检测 | 第34-36页 |
| 3.4. 初步功能研究 | 第36-41页 |
| 3.4.1 性腺组织切片 | 第36-39页 |
| 3.4.2 半定量表达检测 | 第39-40页 |
| 3.4.3 定量表达检测 | 第40-41页 |
| 4 讨论 | 第41-43页 |
| 参考文献 | 第43-46页 |
| 综述 模式生物青鳉的雄性性别决定和分化系统 | 第46-55页 |
| 1 生物体性别决定和分化系统 | 第46-47页 |
| 2 模式生物青鳉 | 第47页 |
| 3 性别决定基因 | 第47-49页 |
| 4. 性别决定和分化的调控网络 | 第49-50页 |
| 5. 性别决定基因突变导致生殖发育畸变 | 第50-51页 |
| 6. 小结和展望 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-55页 |
| 作者简介及攻读学位期间发表的学术论文与研究成果 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 附录A | 第57-60页 |
| 本研究全部引物序列 | 第57-60页 |
| 表A1 突变检测引物序列 | 第57-58页 |
| 表A2 半定量PCR引物序列 | 第58-59页 |
| 表A3 定量PCR引物序列 | 第59-60页 |
| 附录B | 第60页 |
| 缩略语表 | 第60页 |
