| 致谢 | 第7-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-37页 |
| 1. 稻瘟病与稻瘟病菌 | 第16-22页 |
| 1.1 稻瘟病概况 | 第16页 |
| 1.2 稻瘟病菌在寄主叶片的侵染循环 | 第16-18页 |
| 1.3 稻瘟病菌附着胞的形成和发育 | 第18页 |
| 1.4 稻瘟病菌的根部侵染过程 | 第18-19页 |
| 1.5 稻瘟病菌致病性相关的胞内信号传导途径 | 第19-22页 |
| 1.5.1 环化腺苷酸(cAMP)信号途径 | 第19-20页 |
| 1.5.2 Ca~(2+)离子途径 | 第20页 |
| 1.5.3 MAPK(Mitogen-activated protein kinase)信号传导途径 | 第20-22页 |
| 1.5.4 G蛋白途径 | 第22页 |
| 2. 真核细胞中的液泡发育 | 第22-28页 |
| 2.1 液泡的动态过程 | 第23-24页 |
| 2.2 液泡与真菌的形态建成(菌丝发育) | 第24-25页 |
| 2.3 液泡的同型融合机制 | 第25-26页 |
| 2.4 液泡的融合与裂解平衡 | 第26-28页 |
| 3. 囊泡的运输 | 第28-35页 |
| 3.1 SNARE蛋白 | 第28-29页 |
| 3.2 Rab GTPase | 第29-32页 |
| 3.2.1 Rab蛋白的结构 | 第30-31页 |
| 3.2.2 Rab蛋白的种类 | 第31页 |
| 3.2.3 Rab蛋白的功能 | 第31-32页 |
| 3.3 多个膜泡运输途径 | 第32页 |
| 3.4 特殊的膜泡运输融合机制-细胞自噬 | 第32-35页 |
| 3.4.1 自噬的分类 | 第33页 |
| 3.4.2 自噬过程 | 第33-34页 |
| 3.4.3 参与自噬的主要基因 | 第34-35页 |
| 4. 本研究的目的和意义 | 第35-37页 |
| 第二章 材料与方法 | 第37-55页 |
| 1. 试验材料 | 第37-41页 |
| 1.1 试验菌株 | 第37页 |
| 1.2 质粒载体 | 第37页 |
| 1.3 仪器 | 第37-38页 |
| 1.4 培养基 | 第38-41页 |
| 1.4.1 稻瘟病菌的培养基 | 第38-40页 |
| 1.4.2 大肠杆菌的培养 | 第40页 |
| 1.4.3 农杆菌诱导培养基AIM | 第40-41页 |
| 2. 试验方法 | 第41-55页 |
| 2.1 PCR | 第41-42页 |
| 2.1.1 常规PCR | 第41-42页 |
| 2.1.2 Q-PCR | 第42页 |
| 2.2 小片段DNA操作 | 第42-44页 |
| 2.3 稻瘟病菌基因组DNA和RNA的提取 | 第44-46页 |
| 2.3.1 菌丝培养 | 第44-45页 |
| 2.3.2 基因组DNA的提取(CTAB法) | 第45页 |
| 2.3.3 基因组RNA的提取 | 第45-46页 |
| 2.4 农杆菌介导的冻融法转化 | 第46-47页 |
| 2.5 稻瘟病菌的T-DNA转化 | 第47页 |
| 2.6 稻瘟病菌基因组DNA Southern杂交(DIG) | 第47-50页 |
| 2.6.1 DNA探针制备 | 第47-48页 |
| 2.6.2 基因组DNA的消化、电泳及变性 | 第48页 |
| 2.6.3 DNA转膜 | 第48-49页 |
| 2.6.4 Southern杂交过程 | 第49页 |
| 2.6.5 免疫显色 | 第49-50页 |
| 2.7 稻瘟病菌生物学及侵染过程病理学观察 | 第50-53页 |
| 2.7.1 菌株的保存和培养 | 第50页 |
| 2.7.2 稻瘟病菌附着胞的诱导 | 第50-51页 |
| 2.7.3 大麦离体接种 | 第51页 |
| 2.7.4 水稻苗喷雾接种 | 第51页 |
| 2.7.5 水稻根部接种 | 第51页 |
| 2.7.6 稻瘟病菌的有性杂交 | 第51-52页 |
| 2.7.7 细胞自噬现象的观察 | 第52页 |
| 2.7.8 荧光表达的观察 | 第52页 |
| 2.7.9 透射电镜样品制备方法 | 第52-53页 |
| 2.8 酵母互补分析 | 第53-55页 |
| 2.8.1 培养酵母的培养基 | 第53页 |
| 2.8.2 酵母质粒的提取和PCR | 第53页 |
| 2.8.3 酵母的高效转化 | 第53-55页 |
| 第三章 稻瘟病菌液泡运输相关基因MoYpt7功能的研究 | 第55-79页 |
| 1. MoYpt7基因的分离、克隆和同源性分析 | 第55-59页 |
| 2. MoYpt7基因缺失突变体和恢复突变体的获得 | 第59-62页 |
| 2.1 MoYpt7基因敲除载体的构建 | 第59页 |
| 2.2 基因缺失突变体ΔMoYpt7的获得 | 第59页 |
| 2.3 互补载体的构建 | 第59-60页 |
| 2.4 反转录PCR | 第60-62页 |
| 3. MoYpt7基因细胞内GFP定位 | 第62-64页 |
| 3.1 MoYpt7蛋白的结构预测 | 第62页 |
| 3.2 通用载体p1300RPGFP的构建 | 第62-63页 |
| 3.3 GFP-MoYpt7融合载体的构建 | 第63页 |
| 3.4 荧光观察 | 第63-64页 |
| 4. 突变体ΔMoYpt7表型分析 | 第64-69页 |
| 4.1 突变体菌落形态 | 第65-66页 |
| 4.2 突变体ΔMoYpt7产孢量严重下降 | 第66-67页 |
| 4.3 突变体孢子形态和附着胞形成受影响 | 第67页 |
| 4.4 突变体ΔMoYpt7育性降低 | 第67-69页 |
| 5. 突变体内与液泡相关的运输发生改变 | 第69-74页 |
| 5.1 突变体ΔMoYpt7的细胞自噬过程中断 | 第69页 |
| 5.2 ΔMoYpt7突变体大量小液泡聚集 | 第69页 |
| 5.3 突变体对一定钙离子浓度敏感 | 第69-72页 |
| 5.4 突变体细胞壁完整性受到破坏 | 第72-74页 |
| 6. 突变体ΔMoYpt7致病性丧失 | 第74-78页 |
| 6.1 大麦离体接种 | 第74页 |
| 6.2 水稻喷雾接种 | 第74页 |
| 6.3 水稻根部接种 | 第74-78页 |
| 7. 本章小结 | 第78-79页 |
| 第四章 稻瘟病菌液泡运输相关基因MoMon1功能的研究 | 第79-102页 |
| 1. MoMon1基因的分离和克隆 | 第79-83页 |
| 2. MoMon1同源性分析 | 第83-85页 |
| 3. MoMon1基因缺失突变体和互补突变体的获得 | 第85-88页 |
| 3.1 MoMon1基因敲除载体的构建 | 第85-86页 |
| 3.2 ΔMoMon1突变体的获得 | 第86-88页 |
| 3.3 互补载体的构建 | 第88页 |
| 3.4 RT-PCR和QPCR | 第88页 |
| 4. MoMon1基因的细胞内定位 | 第88-90页 |
| 4.1 MoMon1蛋自的结构预测 | 第89页 |
| 4.2 GFP-MoMon1融合载体的构建 | 第89-90页 |
| 4.3 荧光观察 | 第90页 |
| 5. 突变体表型分析 | 第90-93页 |
| 5.1 突变体菌落形态 | 第90-91页 |
| 5.2 突变体ΔMoMon1气生菌丝产孢量明显下降 | 第91页 |
| 5.3 突变体育性降低 | 第91-92页 |
| 5.4 突变体附着胞的形成受阻 | 第92-93页 |
| 6. 突变体细胞内物质运转途径 | 第93-98页 |
| 6.1 突变体ΔMoMon1的细胞自噬过程中断 | 第93-94页 |
| 6.2 突变体中大量小液泡堆积 | 第94-95页 |
| 6.3 突变体细胞内蛋白运转受阻 | 第95-96页 |
| 6.4 ΔMoMonl突变体细胞壁完整性被破坏 | 第96-98页 |
| 7. ΔMoMonl突变体致病性丧失 | 第98-100页 |
| 7.1 离体大麦叶片接种 | 第98页 |
| 7.2 水稻喷雾接种 | 第98页 |
| 7.3 根部侵染 | 第98-100页 |
| 8. 致病机理研究 | 第100页 |
| 9. 本章小结 | 第100-102页 |
| 第五章 全文讨论及后续研究展望 | 第102-107页 |
| 1. 全文讨论 | 第102-105页 |
| 1.1 MoYpt7和MoMon1基因都是液泡发育融合所必须的 | 第102-103页 |
| 1.2 MoYpt7和MoMon1基因参与稻瘟病菌中细胞的自噬 | 第103-104页 |
| 1.3 液泡运输与气生菌丝的发育 | 第104页 |
| 1.4 MoYpt7和MoMon1基因与稻瘟病菌致病性的关系 | 第104-105页 |
| 2. 本研究的创新点 | 第105页 |
| 3. 今后的研究工作 | 第105-107页 |
| 参考文献 | 第107-112页 |
| 附录：本研究所使用的引物 | 第112页 |
