| 目录 | 第6-9页 |
| 致谢 | 第9-10页 |
| 摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 缩略词表 | 第14-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-24页 |
| 引言 | 第15页 |
| 1. 植物磷信号传导分子机制 | 第15-19页 |
| 1.1 Pi | 第15-16页 |
| 1.2 激素与糖 | 第16-17页 |
| 1.3 活性氧(reactive oxygen species,ROS) | 第17页 |
| 1.4 钙(Ca~(2+)) | 第17页 |
| 1.5 非编码RNA与微卫星RNA(microRNAs) | 第17-19页 |
| 2. 介导磷信号传导的转录因子 | 第19-21页 |
| 2.1 PHR1和PHL1 | 第19-20页 |
| 2.2 其它转录因子 | 第20-21页 |
| 3. 含SPX结构域基因的研究 | 第21-22页 |
| 3.1 酵母磷信号调控网络与SPX结构域 | 第21页 |
| 3.2 植物中的SPX | 第21-22页 |
| 本研究的目的和意义 | 第22-24页 |
| 第二章 水稻SPX3、SPX5基因克隆与基因特征分析 | 第24-44页 |
| 1 材料与方法 | 第24-33页 |
| 1.1 材料 | 第24页 |
| 1.2 方法 | 第24-33页 |
| 1.2.1 水稻溶液培养 | 第24-25页 |
| 1.2.2 植物总RNA的提取 | 第25页 |
| 1.2.3 RNA反转录 | 第25-26页 |
| 1.2.4 cDNA的末端加尾反应 | 第26页 |
| 1.2.5 RACE-PCR(Rapid Amplification of cDNA Ends-PCR) | 第26-27页 |
| 1.2.6 进化树分析 | 第27页 |
| 1.2.7 定量RT-PCR(qRT-PCR)分析 | 第27-28页 |
| 1.2.8 水稻DNA提取方法 | 第28页 |
| 1.2.9 SPX3和SPX5自身启动子基因组融合GFP载体构建 | 第28-29页 |
| 1.2.10 质粒农杆菌转化和农杆菌介导的水稻转化 | 第29页 |
| 1.2.11 水稻总蛋白提取及Western印迹分析 | 第29页 |
| 1.2.12 亚细胞定位表达载体构建 | 第29-30页 |
| 1.2.13 RNA原位杂交 | 第30-32页 |
| 1.2.14 GUS载体的构建、转基因及GUS染色和显微观察 | 第32-33页 |
| 2、结果 | 第33-42页 |
| 2.1 水稻SPX3与SPX5基因克隆 | 第33-34页 |
| 2.2 SPX3和SPX5系统进化树分析 | 第34-35页 |
| 2.3 SPX3与SPX5的表达分析 | 第35-37页 |
| 2.4 SPX3与SPX5缺磷条件下蛋白水平的变化 | 第37-38页 |
| 2.5 SPX3与SPX5亚细胞定 | 第38-39页 |
| 2.6 SPX3与SPX5原位杂交分析 | 第39-40页 |
| 2.7 SPX3与SPX5蛋白组织表达分析 | 第40-42页 |
| 3. 讨论 | 第42-44页 |
| 第三章 SPX3、SPX5基因增强及抑制表达转基因植株分析 | 第44-64页 |
| 1. 材料与方法 | 第44-49页 |
| 1.1 材料 | 第44页 |
| 1.2. 方法 | 第44-49页 |
| 1.2.1 SPX3和SPX5超表达载体构建 | 第44-45页 |
| 1.2.2 spx3 T-DNA插入突变体鉴定 | 第45页 |
| 1.2.3 SPX5 RNA干涉(RNAi)载体的构建 | 第45页 |
| 1.2.4 农杆菌介导的水稻转化 | 第45页 |
| 1.2.5 T_0代转基因水稻的qRT-PCR检测 | 第45页 |
| 1.2.6 转基因水稻的Southern印迹检测 | 第45-46页 |
| 1.2.7 SPX3和SPX5转基因植株高磷、低磷30天的表型观察 | 第46页 |
| 1.2.8 植物有效磷含量的测定 | 第46页 |
| 1.2.9 植物种子总磷含量的测定 | 第46页 |
| 1.2.10 水稻~(33)P吸收动力学实验 | 第46页 |
| 1.2.11 磷信号基因在SPX3和SPX5转基因植株中的表达分析 | 第46-47页 |
| 1.2.12 酵母双杂分析 | 第47-48页 |
| 1.2.13 双分子荧光互补实验 | 第48页 |
| 1.2.14 蛋白免疫共沉淀实验 | 第48-49页 |
| 2、结果 | 第49-63页 |
| 2.1 SPX3和SPX5超表达转基因株系的鉴定和表型分析 | 第49-51页 |
| 2.3 SPX3和SPX5超表达抑制磷信号基因表达 | 第51页 |
| 2.4 spx3突变体和SPX5 RNA干涉(RNAi)材料的鉴定 | 第51-55页 |
| 2.5 spx3突变体、SPX5干涉及双抑制材料的表型分析 | 第55-57页 |
| 2.6 spx3/SPX5-Ri3对水稻体内磷浓度的影响 | 第57-58页 |
| 2.7 spx3突变体、SPX5干涉及双抑制材料中磷信号基因分析 | 第58-60页 |
| 2.8 SPX3与SPX5蛋白互作 | 第60-63页 |
| 3. 讨论 | 第63-64页 |
| 第四章 SPX3、SPX5与PHR2互作研究 | 第64-71页 |
| 1 材料与方法 | 第64页 |
| 1.1 材料 | 第64页 |
| 1.2. 方法 | 第64页 |
| 1.2.1 遗传材料的表型观察 | 第64页 |
| 1.2.2 植物有效磷含量的测定 | 第64页 |
| 1.2.3 磷饥饿响应基因在遗传材料中的表达分析 | 第64页 |
| 1.2.4 酵母双杂实验 | 第64页 |
| 1.2.5 蛋白免疫共沉淀 | 第64页 |
| 2、结果 | 第64-70页 |
| 2.1 SPX3与SPX5抑制PHR2功能 | 第64-66页 |
| 2.2 SPX3与SPX5不参与PH02调控机制 | 第66-68页 |
| 2.3 PHR2蛋白与SPX3和SPX5蛋白互作研究 | 第68-70页 |
| 3. 讨论 | 第70-71页 |
| 第五章 结论与展望 | 第71-73页 |
| 1、结论 | 第71页 |
| 2、展望 | 第71-73页 |
| 参考文献 | 第73-80页 |
| 附件 | 第80-91页 |
| 攻读博士学位期间发表的科研论文 | 第91页 |
