| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 缩略词表 | 第9-15页 |
| 第一部分 文献综述 | 第15-29页 |
| 第一章 汞毒害作用及植物耐汞毒害的机制 | 第15-20页 |
| 1 前言 | 第15-16页 |
| 2 汞对植物生长发育的影响 | 第16-17页 |
| 3 植物耐汞胁迫的生理机制 | 第17-18页 |
| 3.1 激活体内的抗氧化系统 | 第17-18页 |
| 3.2 细胞器的区域化作用及有机物的螯合作用 | 第18页 |
| 4 植物耐汞胁迫的分子机制 | 第18-20页 |
| 第二章 数量性状QTL(quantitative trait loci)概述 | 第20-25页 |
| 1 QTL定位的原理 | 第20页 |
| 2 遗传连锁图谱的构建 | 第20-21页 |
| 2.1 亲本的选择 | 第20页 |
| 2.2 QTL作图群体 | 第20-21页 |
| 3 QTL定位的分析方法 | 第21页 |
| 4 影响QTL定位的因素 | 第21-22页 |
| 5 QTL的精细定位与克隆 | 第22-23页 |
| 6 QTL定位在水稻重金属离子胁迫中的应用 | 第23-25页 |
| 第三章 植物蛋白磷酸酶PP2C功能的研究进展 | 第25-29页 |
| 1 蛋白磷酸酶的分类 | 第25页 |
| 2 植物蛋白磷酸酶PP2C | 第25-26页 |
| 3 植物PP2C与抗逆 | 第26-27页 |
| 4 植物PP2C研究的意义 | 第27页 |
| 5 本课题研究的意义 | 第27-28页 |
| 6 技术路线 | 第28-29页 |
| 6.1 水稻耐汞性状的QTL分析 | 第28页 |
| 6.2 耐汞相关基因OsPP2C功能的研究 | 第28-29页 |
| 第二部分 研究论文 | 第29-66页 |
| 第一章 水稻苗期耐汞QTLs的分析 | 第29-36页 |
| 1 前言 | 第29页 |
| 2 实验材料与方法 | 第29-31页 |
| 2.1 实验材料 | 第29-30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-31页 |
| 2.2.1 种子的萌发与培养 | 第30页 |
| 2.2.2 汞耐性的评估 | 第30页 |
| 2.2.3 群体种子的胁迫处理 | 第30页 |
| 2.2.4 分子图谱的构建和QTL分析 | 第30-31页 |
| 3 实验结果 | 第31-34页 |
| 3.1 越富和IRAT109耐汞性差异 | 第31页 |
| 3.2 表型表现 | 第31-32页 |
| 3.3 耐汞QTLs的检测 | 第32-34页 |
| 4 分析与讨论 | 第34-36页 |
| 第二章 HgCl_2胁迫下9311和Azucena耐性比较分析 | 第36-41页 |
| 1 前言 | 第36页 |
| 2 材料与方法 | 第36-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第36页 |
| 2.2 实验方法 | 第36-37页 |
| 2.2.1 种子的萌发与培养 | 第36-37页 |
| 2.2.2 幼苗生长指标的测定 | 第37页 |
| 2.2.3 汞含量的测定 | 第37页 |
| 3 实验结果 | 第37-40页 |
| 3.1 HgCl_2处理浓度的确定 | 第37-38页 |
| 3.2 HgCl_2胁迫对水稻幼苗相对根长(根干重)和相对苗高(苗干重)的影响 | 第38-39页 |
| 3.3 水稻幼苗根和地上部分汞含量分析 | 第39-40页 |
| 4 分析 | 第40-41页 |
| 第三章 OsPP2C基因的克隆及汞胁迫下的表达分析 | 第41-55页 |
| 1 前言 | 第41-42页 |
| 2 材料与方法 | 第42-47页 |
| 2.1 实验材料及培养 | 第42页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第42页 |
| 2.1.2 实验材料的培养 | 第42页 |
| 2.2 RNA提取 | 第42-43页 |
| 2.3 双链cDNA的合成 | 第43-44页 |
| 2.3.1 第一链cDNA合成 | 第43-44页 |
| 2.3.2 第二链cDNA合成 | 第44页 |
| 2.4 实时定量PCR | 第44-47页 |
| 2.4.1 引物的设计 | 第44-45页 |
| 2.4.2 定量PCR片段的扩增 | 第45页 |
| 2.4.3 PCR扩增产物的检测 | 第45页 |
| 2.4.4 PCR扩增产物的回收和纯化 | 第45页 |
| 2.4.5 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第45-46页 |
| 2.4.6 目的片段的连接 | 第46页 |
| 2.4.7 连接产物的转化、蓝白斑筛选、菌落PCR检测及菌液保存 | 第46页 |
| 2.4.8 序列测定 | 第46页 |
| 2.4.9 实时定量PCR分析OsPP2C基因的表达 | 第46-47页 |
| 3 OsPP2C基因的克隆 | 第47-49页 |
| 3.1 OsPP2C基因cDNA全长克隆 | 第47-48页 |
| 3.2 OsPP2C基因组全长克隆 | 第48-49页 |
| 3.4 PCR扩增产物序列的测定 | 第49页 |
| 4 实验结果 | 第49-53页 |
| 4.1 HgCl_2胁迫下水稻幼苗根中OsPP2C基因的表达 | 第49-50页 |
| 4.2 OsPP2C基因cDNA全长 | 第50-51页 |
| 4.3 OsPP2C基因组DNA全长 | 第51页 |
| 4.4 水稻OsPP2C基因序列结构分析 | 第51-53页 |
| 5 讨论 | 第53-55页 |
| 第四章 OsPP2C基因的原核表达及功能分析 | 第55-66页 |
| 1 前言 | 第55页 |
| 2 材料与方法 | 第55-61页 |
| 2.1 实验材料 | 第55页 |
| 2.2 技术与方法 | 第55-61页 |
| 2.2.1 引物的设计与合成 | 第55-56页 |
| 2.2.2 质粒的提取 | 第56页 |
| 2.2.3 OsPP2C基因的克隆 | 第56-57页 |
| 2.2.4 PCR扩增产物检测 | 第57页 |
| 2.2.5 PCR扩增产物的回收与纯化 | 第57页 |
| 2.2.6 原核表达载体的构建 | 第57-58页 |
| 2.2.8 大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)的制备 | 第58页 |
| 2.2.9 表达载体pET-24a-OsPP2C转化入BL21(DE3)感受态细胞 | 第58页 |
| 2.2.10 重组大肠杆菌的鉴定 | 第58-59页 |
| 2.2.11 OsPP2C基因在大肠杆菌中的诱导表达 | 第59页 |
| 2.2.12 SDS-PAGE检测融合蛋白表达 | 第59-60页 |
| 2.2.13 聚丙烯酰胺凝胶的染色及脱色 | 第60页 |
| 2.2.14 HgCl_2胁迫对大肠杆菌生长的影响 | 第60-61页 |
| 2.2.15 大肠杆菌汞含量的测定 | 第61页 |
| 3 实验结果 | 第61-64页 |
| 3.1 原核表达载体pET-24a-OsPP2C的构建 | 第61-62页 |
| 3.2 重组载体pET-24a-OsPP2C在大肠杆菌中的表达 | 第62页 |
| 3.3 重组大肠杆菌对不同浓度汞离子耐性的比较分析 | 第62-63页 |
| 3.4 大肠杆菌汞含量分析 | 第63-64页 |
| 4 讨论 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第76-77页 |
