| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 第一部分 文献综述 | 第12-22页 |
| 第一章 酵母3’,5’二磷酸核苷酸酶 | 第12-20页 |
| 1 3’,5’二磷酸核苷酸酶的发现 | 第13-14页 |
| 2 YND的结构 | 第14-15页 |
| 3 YND核苷酸酶阳离子敏感 | 第15-16页 |
| 4 YND同源物 | 第16-18页 |
| 5 YND的超表达促进植物耐盐 | 第18-20页 |
| 第二章 本课题的研究目的及意义 | 第20-22页 |
| 第二部分 研究内容 | 第22-74页 |
| 第一章 钙离子依赖的酵母3’,5’-二磷酸核苷酸酶亲和层析体系的构建 | 第22-58页 |
| 1 前言 | 第22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-40页 |
| 2.1 菌株与载体 | 第22页 |
| 2.2 酶与生化试剂 | 第22-23页 |
| 2.3 pND-APSK与pND-3c表达载体的构建 | 第23-28页 |
| 2.4 pND-APSK与pND-3C的表达纯化及大肠杆菌APSK活性测定 | 第28-32页 |
| 2.5 pHND表达载体构建 | 第32-36页 |
| 2.6 不同亲和标签的可溶性比较(pGST-SAC,pSUMO-SAC和pYND-SAC) | 第36页 |
| 2.7 增强酵母YND与底物PAP特异性结合的尝试 | 第36-38页 |
| 2.8 YND相关实验 | 第38-40页 |
| 3 实验结果 | 第40-55页 |
| 3.1 pND载体构建 | 第40-43页 |
| 3.2 pHND载体构建 | 第43-46页 |
| 3.3 不同标签可溶性比较 | 第46-47页 |
| 3.4 增强YND与PAP结合的实验结果 | 第47-49页 |
| 3.5 钙离子与YND和PAP之间的关系 | 第49-51页 |
| 3.6 EGTA对YND的螯合作用 | 第51-52页 |
| 3.7 流速测定 | 第52页 |
| 3.8 不同pH值对YND与底物结合的影响 | 第52-53页 |
| 3.9 载体蛋白产量的测定 | 第53页 |
| 3.10 不同温度诱导YND | 第53-54页 |
| 3.11 分子量测定结果 | 第54页 |
| 3.12 实验结果总结 | 第54-55页 |
| 4 讨论 | 第55-58页 |
| 第二章 3’,5'-二磷酸腺核苷酸特异性3’-核苷酸酶的构建分析 | 第58-63页 |
| 1 前言 | 第58页 |
| 2 材料与方法 | 第58-59页 |
| 2.1 菌株与载体 | 第58页 |
| 2.2 酶与生化试剂 | 第58页 |
| 2.3 YND G236定点突变 | 第58-59页 |
| 3 实验结果 | 第59-63页 |
| 3.1 突变引物设计 | 第59-60页 |
| 3.2 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测蛋白的诱导表达及纯化 | 第60-61页 |
| 3.3 蛋白定量 | 第61页 |
| 3.4 G236突变蛋白酶活性测定 | 第61-62页 |
| 3.5 讨论 | 第62-63页 |
| 第三章 5’-腺苷磷酰硫酸激酶及R68K突变体磷酸化5’-腺苷一磷酸 | 第63-74页 |
| 1 前言 | 第63页 |
| 2 材料与方法 | 第63-66页 |
| 2.1 菌株与载体 | 第63页 |
| 2.2 酶与生化试剂 | 第63页 |
| 2.3 大肠杆菌APSK R68K系列突变 | 第63-66页 |
| 3 实验结果 | 第66-72页 |
| 3.1 突变引物设计 | 第66-68页 |
| 3.2 PCR扩增结果检测 | 第68页 |
| 3.3 蛋白的诱导表达及纯化结果 | 第68-70页 |
| 3.4 蛋白定量 | 第70页 |
| 3.5 活性测定 | 第70-72页 |
| 4 讨论 | 第72-74页 |
| 参考文献 | 第74-79页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
