| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 1 文献综述 | 第12-25页 |
| 1.1 草莓主要病害概述 | 第12页 |
| 1.2 草莓灰霉病及其抗药性 | 第12-16页 |
| 1.2.1 草莓灰霉病概述 | 第12-13页 |
| 1.2.2 草莓灰霉病的化学防治 | 第13页 |
| 1.2.3 草莓灰霉病的抗药性 | 第13-16页 |
| 1.2.3.1 对苯并咪唑类杀菌剂的抗性 | 第14页 |
| 1.2.3.2 对N-苯基氨基甲酸酯类杀菌剂的抗性 | 第14页 |
| 1.2.3.3 对甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂的抗性 | 第14-15页 |
| 1.2.3.4 对二甲酰亚胺类杀菌剂的抗性 | 第15页 |
| 1.2.3.5 对苯吡咯类杀菌剂的抗性 | 第15-16页 |
| 1.2.2.6 对苯胺基嘧啶类杀菌剂的抗性 | 第16页 |
| 1.2.3.7 对琥珀酸脱氢酶抑制剂的抗性 | 第16页 |
| 1.3 草莓炭疽病及其抗药性 | 第16-19页 |
| 1.3.1 草莓炭疽病概述 | 第16-17页 |
| 1.3.2 草莓炭疽病的化学防治 | 第17页 |
| 1.3.3 草莓炭疽病抗药性 | 第17-19页 |
| 1.3.3.1 对苯并咪唑类杀菌剂的抗性 | 第17-18页 |
| 1.3.3.2 对甾醇脱甲基抑制剂的抗性 | 第18页 |
| 1.3.3.3 对甲氧基丙烯酸酯类（QoIs）杀菌剂的抗性 | 第18-19页 |
| 1.4 植物病原菌抗药性检测技术 | 第19-21页 |
| 1.4.1 杀菌剂抗药性离体生物测定 | 第19页 |
| 1.4.2 病原菌及其抗药性分子检测 | 第19-21页 |
| 1.4.2.1 聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction, PCR） | 第19页 |
| 1.4.2.2 荧光定量PCR（Real-time Quantitative PCR Detecting System, qPCR） | 第19-20页 |
| 1.4.2.3 等位基因特异性寡核苷酸（Allele Special Oligonutide, ASO）探针法 | 第20页 |
| 1.4.2.4 单链构象多态性（Single-Strand Conformation Polymorphism, SSCP）分析 | 第20页 |
| 1.4.2.5 限制性片段长度多态性聚合酶链式反应( RFLP-PCR) | 第20-21页 |
| 1.5 环介导等温扩增（Loop-Mediated Isothermal Amplification, LAMP）检测技术 | 第21-23页 |
| 1.5.1 LAMP扩增过程 | 第21-22页 |
| 1.5.2 LAMP反应体系 | 第22页 |
| 1.5.3 LAMP技术的检测方法 | 第22页 |
| 1.5.4 LAMP检测的应用 | 第22-23页 |
| 1.5.4.1 LAMP检测细菌 | 第22-23页 |
| 1.5.4.2 LAMP检测病毒 | 第23页 |
| 1.5.4.3 LAMP检测植物病原真菌及其抗药性 | 第23页 |
| 1.6 研究目的和意义 | 第23-25页 |
| 2 检测草莓灰霉病菌抗苯并咪唑类杀菌剂E198A基因型的LAMP体系的建立与应用 | 第25-39页 |
| 2.1 材料方法 | 第25-29页 |
| 2.1.1 供试材料与仪器试剂 | 第25-26页 |
| 2.1.2 引物设计 | 第26-27页 |
| 2.1.3 基因组DNA提取 | 第27页 |
| 2.1.4 引物筛选 | 第27页 |
| 2.1.5 LAMP反应体系的优化 | 第27页 |
| 2.1.6 LAMP反应条件的优化 | 第27-28页 |
| 2.1.7 LAMP灵敏度和常规PCR比较 | 第28页 |
| 2.1.8 LAMP特异性准确度测试 | 第28页 |
| 2.1.9 LAMP对田间样品的检测 | 第28-29页 |
| 2.1.9.1 田间草莓灰霉病样品核酸的提取 | 第28页 |
| 2.1.9.2 LAMP检测 | 第28-29页 |
| 2.1.9.3 区分剂量法 | 第29页 |
| 2.1.9.4 不同表现型灰霉病菌 β-tubulin基因的序列比较 | 第29页 |
| 2.2 结果与分析 | 第29-36页 |
| 2.2.1 LAMP特异性引物 | 第29-30页 |
| 2.2.2 Bst DNA聚合酶量的优化 | 第30-31页 |
| 2.2.3 dNTPs浓度的优化 | 第31页 |
| 2.2.4 引物浓度的优化 | 第31-32页 |
| 2.2.5 甜菜碱浓度的优化 | 第32页 |
| 2.2.6 Mg~(2+)浓度的优化 | 第32-33页 |
| 2.2.7 最终体系确定 | 第33页 |
| 2.2.8 最佳LAMP反应条件 | 第33-34页 |
| 2.2.9 LAMP检测限 | 第34-35页 |
| 2.2.10 LAMP检测的准确度 | 第35-36页 |
| 2.2.11 LAMP在 1.5h内检测田间草莓灰霉病的抗药性 | 第36页 |
| 2.3 讨论 | 第36-39页 |
| 3 快速检测和评估草莓灰霉病菌对QoIs类杀菌剂的抗性发展 | 第39-49页 |
| 3.1 材料方法 | 第39-42页 |
| 3.1.1 供试菌株及试剂 | 第39页 |
| 3.1.2 构建LAMP体系中模板DNA的提取 | 第39页 |
| 3.1.3 LAMP引物的设计与筛选 | 第39-41页 |
| 3.1.4 LAMP反应体系 | 第41页 |
| 3.1.5 LAMP反应条件的确定 | 第41页 |
| 3.1.6 LAMP检测灵敏度 | 第41-42页 |
| 3.1.7 LAMP检测的田间应用 | 第42页 |
| 3.1.7.1 LAMP检测田间草莓灰霉病样品 | 第42页 |
| 3.1.7.2 灰霉病菌对嘧菌酯的抗性测定 | 第42页 |
| 3.1.7.3 不同表现型灰霉病菌cytb基因的序列比较 | 第42页 |
| 3.2 结果与分析 | 第42-47页 |
| 3.2.1 两个LAMP反应的目视检测 | 第42-43页 |
| 3.2.2 LAMP检测最佳反应条件 | 第43-44页 |
| 3.2.3 确定LAMP最低检测限 | 第44-45页 |
| 3.2.4 在 1h内完成田间草莓灰霉病抗药性的LAMP检测 | 第45-47页 |
| 3.3 讨论 | 第47-49页 |
| 4 草莓苗期炭疽病LAMP检测的建立和应用 | 第49-57页 |
| 4.1 材料与方法 | 第49-51页 |
| 4.1.1 主要试剂与仪器 | 第49页 |
| 4.1.2 引物设计和筛选 | 第49-50页 |
| 4.1.3 建立草莓苗期炭疽病LAMP检测体系 | 第50页 |
| 4.1.4 LAMP特异性测试 | 第50页 |
| 4.1.5 直接提取草莓植株样品DNA | 第50-51页 |
| 4.1.5.1 用横向测流试纸（lateral-flow device, LFD）直接提取草莓植株组织DNA | 第50-51页 |
| 4.1.5.2 碱性聚乙二醇 200（PEG 200）直接从植株提取DNA | 第51页 |
| 4.1.6 LAMP对田间草莓植株样品的检测 | 第51页 |
| 4.2 结果与分析 | 第51-56页 |
| 4.2.1 LAMP检测最佳反应条件的确定 | 第51-52页 |
| 4.2.2 LAMP检测的特异性 | 第52-53页 |
| 4.2.3 LAMPP检测灵敏敏度 | 第53-54页 |
| 4.2.4 LAMP检测验证LFD和碱性PEG提取植物样品DNA可行性 | 第54-55页 |
| 4.2.5 LAMP检测田间草莓炭疽病植株样品 | 第55-56页 |
| 4.3 讨论 | 第56-57页 |
| 5 草莓炭疽病菌抗QoIs类和苯并咪唑类杀菌剂的LAMP检测技术 | 第57-67页 |
| 5.1 材料与方法 | 第57-59页 |
| 5.1.1 供试药剂 | 第57页 |
| 5.1.2 菌株的采集和分离 | 第57页 |
| 5.1.3 对杀菌剂的抗性测定方法 | 第57页 |
| 5.1.4 β-tubulin基因和cytb基因序列比较 | 第57-58页 |
| 5.1.5 DNA的提取 | 第58页 |
| 5.1.6 LAMP检测的引物设计和筛选 | 第58-59页 |
| 5.1.7 草莓炭疽病抗药性LAMP检测体系的建立 | 第59页 |
| 5.1.8 LAMP检测体系准确度分析 | 第59页 |
| 5.2 结果与分析 | 第59-65页 |
| 5.2.1 草莓炭疽病菌对杀菌剂的抗药性 | 第59-60页 |
| 5.2.2 对QoIs类和苯并咪唑类杀菌剂的抗性分子机制 | 第60-61页 |
| 5.2.3 LAMP检测的特异性引物 | 第61-63页 |
| 5.2.4 G143A草莓炭疽病菌LAMP检测最佳反应条件 | 第63-64页 |
| 5.2.5 G143A草莓炭疽病菌LAMP的检测限 | 第64-65页 |
| 5.2.6 G143A草莓炭疽病菌LAMP检测的准确度 | 第65页 |
| 5.3 讨论 | 第65-67页 |
| 6 全文总结 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-76页 |
| 附录 | 第76-82页 |
| 个人简介 | 第82-83页 |
| 致谢 | 第83页 |
