| 致谢 | 第8-9页 |
| 中文摘要 | 第9-11页 |
| 英文摘要 | 第11页 |
| 第一部分 文献综述 | 第13-34页 |
| 第一章 表皮生长因子研究进展 | 第14-24页 |
| 1．1 表皮生长因子概述 | 第14-16页 |
| 1．1．1 表皮生长因子的发现和命名 | 第14页 |
| 1．1．2 EGF的来源 | 第14-15页 |
| 1．1．3 EGF家族 | 第15-16页 |
| 1．2 EGF的结构和功能 | 第16-18页 |
| 1．2．1 hEGF基因和蛋白质的结构 | 第16-17页 |
| 1．2．2 EGF的结构和功能的关系 | 第17-18页 |
| 1．3 EGF受体和作用机制 | 第18-19页 |
| 1．4 EGF的生物学效应和应用 | 第19页 |
| 1．5 EGF和肿瘤 | 第19-20页 |
| 1．6 EGF对胃肠道的生物学效应 | 第20-21页 |
| 1．7 EGF的基因表达 | 第21-23页 |
| 1．7．1 原核表达 | 第21-22页 |
| 1．7．2 真核表达 | 第22-23页 |
| 1．8 EGF的临床应用与展望 | 第23-24页 |
| 第二章 杆状病毒表达载体系统 | 第24-34页 |
| 2．1 杆状病毒表达系统的建立及其原理 | 第24-26页 |
| 2．2 杆状病毒表达系统的特点 | 第26-27页 |
| 2．3 杆状病毒表达系统的改进 | 第27-30页 |
| 2．4 外源基因表达产物的后加工 | 第30-31页 |
| 2．5 影响表达水平的因素 | 第31-33页 |
| 2．6 重组杆状病毒的应用展望 | 第33-34页 |
| 第二部分 研究内容 | 第34-88页 |
| 第三章 重组转移载体的构建 | 第35-53页 |
| 1． 材料 | 第35页 |
| 2． 方法 | 第35-45页 |
| 2．1 试剂的配制 | 第35-37页 |
| 2．2 以质粒pET_（22）-EGF为模板扩增目的片段 | 第37页 |
| 2．3 以病毒AcMNPV为模板PCR扩增多角体（Ph）基因 | 第37-38页 |
| 2．4 PCR Purification kit回收PCR产物 | 第38页 |
| 2．5 融合基因Ph-EGF的构建 | 第38-40页 |
| 2．6 重组转移载体pBacPh-EGF的构建 | 第40-41页 |
| 2．7 E．coli TG1感受态细胞的制备 | 第41-42页 |
| 2．8 连接产物转化感受态细胞 | 第42页 |
| 2．9 碱法小批量抽提质粒DNA | 第42页 |
| 2．10 质粒的大量制备 | 第42-43页 |
| 2．11 Sepharose 2B柱纯化大量抽提的质粒DNA | 第43-44页 |
| 2．12 核酸电泳 | 第44页 |
| 2．13 重组转移载体的鉴定 | 第44-45页 |
| 3． 结果、分析与讨论 | 第45-53页 |
| 3．1 人表皮生长因子基因的序列测定 | 第45-46页 |
| 3．2 重组转移载体pBacPh-EGF的构建 | 第46-50页 |
| 3．3 重组转移载体pBacPh-EGF的鉴定 | 第50-51页 |
| 3．4 讨论 | 第51-53页 |
| 第四章 共转染及重组病毒的筛选 | 第53-66页 |
| 1． 材料 | 第53页 |
| 2． 方法 | 第53-59页 |
| 2．1 试剂的配制 | 第53-55页 |
| 2．2 细胞培养与冻存 | 第55页 |
| 2．3 病毒培养 | 第55页 |
| 2．4 病毒滴度测定 | 第55页 |
| 2．5 Bm-BacPAK6 DNA的提取 | 第55-56页 |
| 2．6 Bm-BacPAK6 DNA酶切线性化 | 第56页 |
| 2．7 重组转移质粒与线性化病毒DNA共转染 | 第56页 |
| 2．8 重组病毒的筛选 | 第56-57页 |
| 2．9 重组病毒的DNA斑点杂交鉴定 | 第57-59页 |
| 2．10 重组病毒的PCR鉴定 | 第59页 |
| 3． 结果、分析与讨论 | 第59-66页 |
| 3．1 病毒Bm-BacPAK6 DNA的线性化 | 第59-60页 |
| 3．2 共转染及重组病毒的筛选 | 第60-62页 |
| 3．3 重组病毒的鉴定 | 第62-63页 |
| 3．4 重组病毒的滴度测定 | 第63-64页 |
| 3．5 讨论 | 第64-66页 |
| 第五章 重组病毒在家蚕培养细胞、幼虫中的表达及活性测定 | 第66-88页 |
| 1． 材料 | 第66页 |
| 2． 方法 | 第66-73页 |
| 2．1 试剂的配制 | 第66-68页 |
| 2．2 小鼠成纤维细胞的培养 | 第68页 |
| 2．3 重组病毒在家蚕培养细胞的表达 | 第68-69页 |
| 2．4 重组病毒在家蚕幼虫中的表达 | 第69页 |
| 2．5 SDS-PAGE蛋白电泳分析 | 第69页 |
| 2．6 表达产物的Western blotting分析 | 第69-70页 |
| 2．7 表达产物的ELISA检测 | 第70-71页 |
| 2．8 促Balb／c 3T3细胞增殖的生物学活性测定 | 第71-72页 |
| 2．9 在蚕蛹中的表达 | 第72页 |
| 2．10 动物试验 | 第72页 |
| 2．11 病理组织切片制作 | 第72-73页 |
| 3． 结果、分析与讨论 | 第73-88页 |
| 3．1 rBmBacPh-EGF在家蚕培养细胞中的表达结果 | 第73-75页 |
| 3．1．1 细胞表达产物的蛋白质电泳分析 | 第73-74页 |
| 3．1．2 BmN细胞内表达产物的ELISA检测 | 第74-75页 |
| 3．2 rBmBacPh-EGF在家蚕幼虫中的表达 | 第75-77页 |
| 3．2．1 表达产物的SDS-PAGE电泳 | 第75-76页 |
| 3．2．2 表达产物的ELISA检测 | 第76-77页 |
| 3．3 EGF含量标准曲线的制作及表达量估计 | 第77-78页 |
| 3．4 表达产物对Balb／c 3T3细胞的增殖作用 | 第78-82页 |
| 3．4．1 培养基成分对细胞测活的影响 | 第78页 |
| 3．4．2 Balb／c 3T3细胞浓度对测活的影响 | 第78-79页 |
| 3．4．3 家蚕细胞表达产物对Balb／c 3T3细胞的增殖作用 | 第79-80页 |
| 3．4．4 家蚕幼虫表达产物对Balb／c 3T3细胞的增殖作用 | 第80-82页 |
| 3．5 体内生物活性研究结果 | 第82-86页 |
| 3．5．1 病理学检查结果 | 第82-83页 |
| 3．5．2 胃损伤指数和抑制率分析 | 第83页 |
| 3．5．3 光镜病理组织学检查 | 第83-86页 |
| 3．6 讨论 | 第86-88页 |
| 结论 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-94页 |
| 基因测序图谱 | 第94页 |
