| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-12页 |
| 第一章 四环素可诱导慢病毒载体的研究进展 | 第12-31页 |
| 1 前言 | 第12-18页 |
| ·慢病毒载体与基因治疗 | 第12-13页 |
| ·四环素调控的真核表达载体 | 第13-16页 |
| ·四环素可诱导慢病毒载体 | 第16-18页 |
| 2 四环素调控的慢病毒载体Tet-off-eGFP，Tet-off-mKate 和Tet-off-hIL-24 的构建 | 第18-28页 |
| ·实验材料 | 第18-21页 |
| ·生化试剂 | 第18页 |
| ·培养基 | 第18页 |
| ·细胞培养液 | 第18页 |
| ·菌株和质粒 | 第18-19页 |
| ·细胞株系及培养条件 | 第19页 |
| ·引物合成 | 第19-20页 |
| ·主要仪器与设备 | 第20-21页 |
| ·实验方法 | 第21-25页 |
| ·质粒DNA 的制备 | 第21-22页 |
| ·从琼脂糖凝胶中回收DNA | 第22页 |
| ·酶切、连接 | 第22-23页 |
| ·PCR 扩增 | 第23页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 | 第23-25页 |
| ·pLV300（可诱导慢病毒Tet-off）的构建 | 第25-28页 |
| ·pkc-TRE 载体的构建 | 第25页 |
| ·pLV300（可诱导慢病毒Tet-off）的构建 | 第25页 |
| ·pLV300-mKate，pLV300-eGFP 和pLV300-hIL-24 的构建 | 第25-28页 |
| 3 实验结果与分析 | 第28-30页 |
| ·质粒pkc-TRE 鉴定 | 第28-29页 |
| ·pLV300（可诱导慢病毒Tet-off）的鉴定 | 第29页 |
| ·pLV300-mKate、pLV300-eGFP、pLV300-hIL-24 的鉴定 | 第29-30页 |
| 4 结论 | 第30-31页 |
| 第二章 慢病毒包装条件优化及四环素调控的慢病毒载体pLV300 调控系统“开”“关”验证 | 第31-53页 |
| 1 前言 | 第31-33页 |
| 2 实验方法 | 第33-39页 |
| ·慢病毒包装条件优化 | 第33-35页 |
| ·PEI 转染法 | 第33页 |
| ·PEI 细胞毒性检测（MTT） | 第33页 |
| ·PEI 转染法优化策略 | 第33-34页 |
| ·磷酸钙转染法 | 第34页 |
| ·磷酸钙转染法条件优化 | 第34页 |
| ·慢病毒包装、纯化及浓缩及滴度测定 | 第34-35页 |
| ·四环素调控的慢病毒LV300 功能鉴定 | 第35-39页 |
| ·四环素（Tetracycline,Tet）细胞毒性检测 | 第35页 |
| ·四环素调控pLV300-mKate 红色荧光蛋白mKate 表达的“开”“关”效应 | 第35页 |
| ·pLV300-mKate 转染HEK 293T/17 细胞研究不同四环素浓度对红色荧光蛋白mKate 的调控效应以及四环素不同作用时间对红色荧光蛋白表达的影响 | 第35页 |
| ·pLV300-hIL-24 转染 HEK 293T/17细胞，酶联免疫吸附试验（Enzyme-linked Immuno-sorbent Assay ,ELISA）检测hIL-24 表达 | 第35-37页 |
| ·研究四环素调控的慢病毒LV300-eGFP 和LV300-mKate 调控功能以及不同浓度四环素对红色荧光蛋白mKate 的调控效应 | 第37-39页 |
| 3 实验结果与分析 | 第39-50页 |
| ·慢病毒包装条件的优化 | 第39-43页 |
| ·PEI 的细胞毒性 | 第39-40页 |
| ·PEI 转染法优化 | 第40页 |
| ·磷酸钙转染法条件优化 | 第40-43页 |
| ·磷酸钙转染法条件优化参数一 | 第40-41页 |
| ·磷酸钙转染法条件优化参数二 | 第41-42页 |
| ·磷酸钙转染法条件优化参数三 | 第42-43页 |
| ·四环素调控的慢病毒载体调控效应的验证 | 第43-50页 |
| ·四环素毒性检测 | 第43-44页 |
| ·四环素调控pLV300-mKate 红色荧光蛋白mKate 表达的“开”“关”效应 | 第44-45页 |
| ·四环素调控的慢病毒pLV300-mKate 调控效应具有四环素浓度依赖性 | 第45-46页 |
| ·pLV300-hIL-24 转染HEK 293T/17 细胞，ELISA 检测不同四环素浓度的hIL-24表达差异 | 第46-47页 |
| ·单质粒四环素调控的慢病毒LV300-mKate 载体是一个有效的“Tet-off”调控系统 | 第47-50页 |
| 4 讨论 | 第50-52页 |
| 5 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-57页 |
| 在线期间发表论文 | 第57-58页 |
| 致谢 | 第58页 |
