| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第11-26页 |
| 1.1 背景 | 第11页 |
| 1.2 甾体化合物概述 | 第11-14页 |
| 1.2.1 甾体化合物的结构 | 第11-12页 |
| 1.2.2 甾体化合物的来源及分类 | 第12-13页 |
| 1.2.3 甾体化合物的应用 | 第13-14页 |
| 1.3 甾体化合物的微生物转化 | 第14-16页 |
| 1.3.1 甾体化合物的研究发展史 | 第14页 |
| 1.3.2 甾体微生物转化的优势 | 第14-15页 |
| 1.3.3 甾体微生物转化类型 | 第15-16页 |
| 1.4 甾体微生物羟化国内外研究现状 | 第16-21页 |
| 1.4.1 甾体微生物羟化菌株的选育和改良 | 第16-17页 |
| 1.4.2 甾体微生物羟化工艺 | 第17-19页 |
| 1.4.3 甾体微生物羟化机理研究 | 第19-21页 |
| 1.5 微生物转化合成三羟基雄甾烯酮的研究 | 第21-24页 |
| 1.5.1 三羟基雄甾烯酮的结构、性质及作用 | 第21-22页 |
| 1.5.2 微生物转化DHEA合成 7α,15α-di OH-DHEA的研究现状 | 第22-23页 |
| 1.5.3 微生物转化合成三羟基雄甾烯酮过程中关键问题分析 | 第23-24页 |
| 1.6 研究意义与主要研究内容 | 第24-26页 |
| 1.6.1 研究意义 | 第24页 |
| 1.6.2 研究内容 | 第24-26页 |
| 第二章 C. lini ST-1 底物谱及羟化特性分析 | 第26-48页 |
| 2.1 引言 | 第26-27页 |
| 2.2 材料与仪器 | 第27-29页 |
| 2.2.1 主要试剂材料 | 第27-28页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第28页 |
| 2.2.3 培养基 | 第28-29页 |
| 2.2.4 菌种 | 第29页 |
| 2.3 实验方法 | 第29-30页 |
| 2.3.1 C. lini ST-1 菌丝体的培养 | 第29页 |
| 2.3.2 C. lini ST-1 转化各甾体化合物 | 第29页 |
| 2.3.3 转化产物的提取与分离 | 第29-30页 |
| 2.3.4 转化产物的鉴定 | 第30页 |
| 2.3.5 各底物转化过程研究 | 第30页 |
| 2.3.6 转化产物羟化途径的验证 | 第30页 |
| 2.3.7 分析方法 | 第30页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第30-46页 |
| 2.4.1 转化产物的鉴定 | 第30-41页 |
| 2.4.2 C. lini ST-1 甾体羟化特性分析 | 第41-43页 |
| 2.4.3 C. lini ST-1 羟化反应机制的分析 | 第43-44页 |
| 2.4.4 C. lini ST-1 双羟化反应机制的验证 | 第44-45页 |
| 2.4.5 各羟化产物得率比较 | 第45-46页 |
| 2.5 本章小结 | 第46-48页 |
| 第三章 环糊精包合技术提高底物DHEA的浓度 | 第48-62页 |
| 3.1 引言 | 第48-49页 |
| 3.2 材料与仪器 | 第49页 |
| 3.2.1 主要试剂材料 | 第49页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第49页 |
| 3.2.3 培养基 | 第49页 |
| 3.2.4 菌种 | 第49页 |
| 3.3 实验方法 | 第49-51页 |
| 3.3.1 C. lini ST-1 菌丝体的培养 | 第49页 |
| 3.3.2 C. lini ST-1 对DHEA的转化 | 第49页 |
| 3.3.3 CDs包合物的制备 | 第49-50页 |
| 3.3.4 测定CDs/DHEA包合物的包合比 | 第50页 |
| 3.3.5 CDs包合法对DHEA转化过程的影响 | 第50页 |
| 3.3.6 转化产物的提取与检测 | 第50页 |
| 3.3.7 CDs/DHEA包合物的表征 | 第50页 |
| 3.3.8 CDs/DHEA包合物热稳定性研究 | 第50-51页 |
| 3.3.9 SEM和TEM分析CDs对菌体表面结构的影响 | 第51页 |
| 3.3.10 CDs对细胞脂肪酸成分的影响 | 第51页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第51-61页 |
| 3.4.1 C. lini ST-1 对不同浓度DHEA的转化 | 第51-52页 |
| 3.4.2 不同种类CDs对C. lini ST-1 转化DHEA的影响 | 第52-53页 |
| 3.4.3 CDs/DHEA摩尔比对C. lini ST-1 转化DHEA的影响 | 第53页 |
| 3.4.4 CDs对DHEA转化过程的影响 | 第53-55页 |
| 3.4.5 X-衍射图谱分析 | 第55-56页 |
| 3.4.6 差热扫描曲线分析 | 第56-57页 |
| 3.4.7 相溶解曲线图谱分析 | 第57-58页 |
| 3.4.8 包合物热稳定性分析 | 第58-59页 |
| 3.4.9 CDs对C. lini ST-1 表面结构的影响 | 第59-60页 |
| 3.4.10 CDs对C. lini ST-1 细胞膜脂肪酸成分的影响 | 第60-61页 |
| 3.5 本章小结 | 第61-62页 |
| 第四章 C. lini ST-1 预诱导转化DHEA及其诱导机制的探究 | 第62-81页 |
| 4.1 引言 | 第62页 |
| 4.2 材料与仪器 | 第62-64页 |
| 4.2.1 主要试剂材料 | 第62-63页 |
| 4.2.2 实验仪器 | 第63-64页 |
| 4.2.3 培养基 | 第64页 |
| 4.2.4 菌种 | 第64页 |
| 4.3 实验方法 | 第64-68页 |
| 4.3.1 C. lini ST-1 菌丝体的培养 | 第64页 |
| 4.3.2 C. lini ST-1 P450酶的诱导及DHEA的转化 | 第64页 |
| 4.3.3 转化产物的提取分离及检测 | 第64页 |
| 4.3.4 CO还原法检测线粒体微粒体P450含量 | 第64页 |
| 4.3.5 SEM分析诱导剂对菌体表面结构的影响 | 第64页 |
| 4.3.6 C. lini ST-1 胞质蛋白的提取 | 第64-65页 |
| 4.3.7 C. lini ST-1 微粒体和线粒体蛋白的提取 | 第65页 |
| 4.3.8 蛋白酶解 | 第65-66页 |
| 4.3.9 iTRAQ标记各蛋白样品 | 第66页 |
| 4.3.10 上机检测 | 第66页 |
| 4.3.11 数据分析 | 第66页 |
| 4.3.12 关键蛋白基因的q RT-PCR验证 | 第66-68页 |
| 4.4 实验结果与讨论 | 第68-80页 |
| 4.4.1 诱导剂种类、浓度及诱导时间的确定 | 第68-70页 |
| 4.4.2 不同诱导条件下DHEA转化过程分析 | 第70-71页 |
| 4.4.3 基于乙醇结构对其诱导机制的初步探讨 | 第71-73页 |
| 4.4.4 诱导剂对C. lini ST-1 P450表达量的影响 | 第73-74页 |
| 4.4.5 诱导剂对菌体表面形态的影响 | 第74-75页 |
| 4.4.6 基于iTRAQ技术的不同诱导条件下差异蛋白的鉴定 | 第75-77页 |
| 4.4.7 差异蛋白功能分类分析 | 第77-79页 |
| 4.4.8 qRT-PCR验证差异蛋白在转录水平的变化 | 第79-80页 |
| 4.5 本章小结 | 第80-81页 |
| 第五章 辅底物偶联辅酶再生体系的构建 | 第81-93页 |
| 5.1 引言 | 第81-82页 |
| 5.2 材料与仪器 | 第82页 |
| 5.2.1 主要试剂材料 | 第82页 |
| 5.2.2 实验仪器 | 第82页 |
| 5.2.3 培养基 | 第82页 |
| 5.2.4 菌种 | 第82页 |
| 5.3 实验方法 | 第82-83页 |
| 5.3.1 C. lini ST-1 菌丝体的培养 | 第82页 |
| 5.3.2 C. lini ST-1 对DHEA的转化 | 第82页 |
| 5.3.3 辅底物再生NADPH体系的建立 | 第82-83页 |
| 5.3.4 胞内NADPH/NADP比值的测定 | 第83页 |
| 5.3.5 转化产物的提取分离及检测 | 第83页 |
| 5.3.6 统计学实验方法及数据分析 | 第83页 |
| 5.4 实验结果与讨论 | 第83-92页 |
| 5.4.1 低NADPH/NADP比值为DHEA转化的限制因素 | 第83-84页 |
| 5.4.2 辅酶前体对DHEA转化的影响 | 第84-85页 |
| 5.4.3 单一辅底物再生NADPH体系的建立 | 第85-86页 |
| 5.4.4 复合辅底物再生NADPH体系的建立 | 第86-87页 |
| 5.4.5 复合辅底物体系对DHEA转化过程的影响 | 第87-88页 |
| 5.4.6 统计学实验方法优化复合工艺参数 | 第88-92页 |
| 5.5 本章小结 | 第92-93页 |
| 主要结论与展望 | 第93-95页 |
| 主要结论 | 第93-94页 |
| 课题展望 | 第94-95页 |
| 论文创新点 | 第95-96页 |
| 致谢 | 第96-98页 |
| 参考文献 | 第98-106页 |
| 附录1：作者在攻读博士学位期间发表的论文 | 第106-108页 |
| 附录2：中英文缩略词对照表 | 第108-109页 |
| 附录3：各转化产物~1H NMR、IR及MS谱图 | 第109-123页 |
| 附录4：差异蛋白鉴定结果 | 第123-129页 |
