| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第11-20页 |
| 1.1 纤维素酶 | 第11-13页 |
| 1.2 产纤维素酶菌种的改良技术 | 第13-15页 |
| 1.2.1 诱变育种技术 | 第13-14页 |
| 1.2.2 原生质体融合技术 | 第14页 |
| 1.2.3 基因组重排技术 | 第14-15页 |
| 1.2.4 基因工程技术 | 第15页 |
| 1.3 纤维素酶产生菌的基因组学研究 | 第15-16页 |
| 1.4 微生物蛋白质组学 | 第16-18页 |
| 1.5 研究内容与意义 | 第18-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-31页 |
| 2.1 长枝木霉A002的诱变育种 | 第20-23页 |
| 2.1.1 试验材料 | 第20页 |
| 2.1.2 酶活力的测定 | 第20-21页 |
| 2.1.2.1 葡萄糖标准曲线的制定 | 第20-21页 |
| 2.1.2.2 粗酶液的制备 | 第21页 |
| 2.1.2.3 内切β-D-1,4-葡聚糖酶活力(CMCase)的测定 | 第21页 |
| 2.1.3 长枝木霉A002的诱变育种 | 第21-23页 |
| 2.1.3.1 长枝木霉A002的紫外诱变 | 第22页 |
| 2.1.3.2 长枝木霉A002的微波诱变 | 第22页 |
| 2.1.3.3 突变菌株的筛选及其遗传稳定性分析 | 第22页 |
| 2.1.3.4 出发菌株A002和突变菌株M06干重的测定 | 第22-23页 |
| 2.2 长枝木霉固态发酵的初步研究 | 第23-24页 |
| 2.2.1 试验试剂 | 第23页 |
| 2.2.2 出发菌株A002和突变菌株M06的固态发酵 | 第23页 |
| 2.2.3 突变菌株M06固态发酵产酶条件的优化 | 第23-24页 |
| 2.3 不同产酶活力长枝木霉蛋白质的提取及其差异蛋白质组学分析 | 第24-31页 |
| 2.3.1 试验试剂 | 第24页 |
| 2.3.2 长枝木霉蛋白质样品的制备 | 第24-27页 |
| 2.3.2.1 菌丝体蛋白质样品的制备 | 第24-25页 |
| 2.3.2.2 胞外蛋白质样品的制备 | 第25-26页 |
| 2.3.2.3 蛋白质的裂解 | 第26页 |
| 2.3.2.4 蛋白质含量测量 | 第26-27页 |
| 2.3.3 双向电泳(2-DE) | 第27-31页 |
| 2.3.3.1 蛋白质的等电聚焦(IEF) | 第27页 |
| 2.3.3.2 蛋白质胶条的平衡 | 第27页 |
| 2.3.3.3 蛋白质的聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第27-28页 |
| 2.3.3.4 蛋白质凝胶固定及其硝酸银染色 | 第28页 |
| 2.3.3.5 蛋白质表达图谱的建立及差异点的确定 | 第28页 |
| 2.3.3.6 蛋白质点胶内醇解及肽段提取 | 第28-29页 |
| 2.3.3.7 LC-MS/MS(液相色谱-二维线性离子阱质谱)分析 | 第29-31页 |
| 3 结果与分析 | 第31-48页 |
| 3.1 长枝木霉A002的诱变育种 | 第31-34页 |
| 3.1.1 长枝木霉A002的紫外诱变 | 第31页 |
| 3.1.2 长枝木霉A002的微波诱变 | 第31-32页 |
| 3.1.3 突变菌株的筛选与稳定性分析 | 第32-34页 |
| 3.2 长枝木霉固态发酵结果 | 第34-38页 |
| 3.2.1 出发菌株A002和突变菌株M06的固态发酵 | 第34-35页 |
| 3.2.2 突变菌株M06固态发酵产酶条件的优化 | 第35-38页 |
| 3.3 长枝木霉诱变的差异蛋白质组学分析 | 第38-48页 |
| 3.3.1 出发菌株A002和突变菌株M06菌丝体差异蛋白质组学分析 | 第38-43页 |
| 3.3.2 出发菌株A002和突变菌株M06胞外蛋白的差异蛋白质组学分析 | 第43-48页 |
| 4 讨论 | 第48-56页 |
| 4.1 诱变育种及其产酶优化分析 | 第48-49页 |
| 4.2 产酶差异的分子机理分析 | 第49-56页 |
| 4.2.1 糖类代谢对产纤维素酶的影响 | 第50-51页 |
| 4.2.2 影响突变菌株M06细胞生长和发育的可能机制 | 第51-53页 |
| 4.2.3 蛋白质合成对产纤维素酶的影响 | 第53-56页 |
| 5 结论 | 第56-58页 |
| 6 参考文献 | 第58-67页 |
| 附录Ⅰ 试剂与培养基配方 | 第67-69页 |
| 附录Ⅱ 二次回归正交旋转设计四因子五水平表 | 第69-70页 |
| 附录Ⅲ 出发菌株A002和突变菌株M06的干重测定分析 | 第70-71页 |
| 附录Ⅳ 试验仪器 | 第71-72页 |
| 附录Ⅴ 长枝木霉A002和突变菌株M06差异蛋白质凝胶图谱 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
