| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 前言 | 第11-21页 |
| 1.1 木薯简介 | 第11-12页 |
| 1.2 植物的抗旱机理 | 第12-13页 |
| 1.2.1 干旱胁迫信号的感知及传导 | 第12页 |
| 1.2.2 渗透调节物质 | 第12页 |
| 1.2.3 植物抗旱相关基因 | 第12-13页 |
| 1.2.4 干旱的生理指标 | 第13页 |
| 1.3 植物的抗寒机理 | 第13-14页 |
| 1.3.1 细胞膜系与植物抗寒性 | 第13页 |
| 1.3.2 植物抗寒性与酶系统多态性 | 第13-14页 |
| 1.3.3 抗寒基因的表达和调控 | 第14页 |
| 1.4 miRNA概述 | 第14-17页 |
| 1.4.1 miRNA的结构特征 | 第14-15页 |
| 1.4.2 miRNA的发生及其生理功能 | 第15-16页 |
| 1.4.3 miRNA与靶mRNA的作用机制 | 第16页 |
| 1.4.4 植物逆境相关的miRNA | 第16-17页 |
| 1.5 靶基因的研究策略 | 第17-18页 |
| 1.5.1 靶基因的获得 | 第17-18页 |
| 1.5.2 靶基因的验证 | 第18页 |
| 1.6 启动子的作用机理 | 第18-21页 |
| 1.6.1 高等植物启动子的结构 | 第18-19页 |
| 1.6.2 真核启动子的类型 | 第19-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-40页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-23页 |
| 2.1.1 干旱处理过程及采样 | 第21-22页 |
| 2.1.2 低温处理及采样 | 第22-23页 |
| 2.2 实验流程 | 第23-24页 |
| 2.3 干旱相关的miRNA的筛选 | 第24-25页 |
| 2.4 miRNA的表达分析 | 第25-29页 |
| 2.4.1 植物样品中RNA的提取 | 第25页 |
| 2.4.2 本实验中miRNA的获得 | 第25页 |
| 2.4.3 Multiplexed RT-PCR法 | 第25-26页 |
| 2.4.4 miRNA反转引物和定量引物的设计 | 第26-27页 |
| 2.4.5 miRNA的反转录、第一链cDNA的检测及定量分析 | 第27-28页 |
| 2.4.6 miRNA与靶基因的数据处理和转换分析方法 | 第28-29页 |
| 2.5 靶基因的表达检测 | 第29-31页 |
| 2.5.1 靶基因的预测 | 第29页 |
| 2.5.2 RNA的提取 | 第29页 |
| 2.5.3 靶基因的的反转录、第一链cDNA的检测 | 第29-31页 |
| 2.5.4 靶基因的定量检测 | 第31页 |
| 2.6 5'-RACE法验证miRNA和靶基因的关系 | 第31-36页 |
| 2.6.1 mRNA的分离 | 第31-32页 |
| 2.6.2 mRNA与Oligo连接(GeneRacer~(TM) RNA Oligo) | 第32-33页 |
| 2.6.3 mRNA反转录成cDNA(SuperScript~(TM)Ⅲ) | 第33页 |
| 2.6.4 cDNA第一链PCR反应 | 第33-34页 |
| 2.6.5 第二轮巢式PCR扩增 | 第34页 |
| 2.6.6 PCR特异片段的回收及纯化 | 第34-35页 |
| 2.6.7 PCR产物克隆测序 | 第35-36页 |
| 2.6.8 序列分析 | 第36页 |
| 2.7 novel4启动子的克隆和分析 | 第36-39页 |
| 2.7.1 研究基础 | 第36-37页 |
| 2.7.2 序列比对 | 第37页 |
| 2.7.3 序列的克隆 | 第37-38页 |
| 2.7.4 序列分析 | 第38-39页 |
| 2.8 生理指标的测定 | 第39-40页 |
| 2.8.1 无机渗透调节物质 | 第39页 |
| 2.8.2 有机渗透调节物质ABA测定方法 | 第39页 |
| 2.8.3 数据处理及统计方法 | 第39-40页 |
| 3 结果与分析 | 第40-71页 |
| 3.1 苗期干旱和寒害胁迫鉴定 | 第40-44页 |
| 3.1.1 干旱材料的表型变化及采样等级标准 | 第40-42页 |
| 3.1.2 低温材料的表型变化及采样等级标准 | 第42-44页 |
| 3.2 miRNA的筛选结果 | 第44页 |
| 3.3 novel4与其靶基因的表达分析 | 第44-52页 |
| 3.3.1 novel4与其靶基因的荧光定量的条件摸索 | 第44-46页 |
| 3.3.2 novel4与靶基因在干旱胁迫下的表达调控模式分析 | 第46-47页 |
| 3.3.3 novel4与靶基因在低温胁迫下的表达调控模式分析 | 第47-48页 |
| 3.3.4 novel4在功能叶、根、离区的表达分析 | 第48页 |
| 3.3.5 novel4在干旱胁迫下各组织的表达量分析 | 第48-50页 |
| 3.3.6 novel4在低温胁迫下各组织的表达量分析 | 第50-52页 |
| 3.4 novel4与靶基因切割位点的分析 | 第52-53页 |
| 3.5 novel4 5'调控区的顺式作用元件的生物信息学分析 | 第53-67页 |
| 3.5.1 生物信息学获取序列novel4 5'端调控区 | 第53页 |
| 3.5.2 novel4 5'调控区的克隆条件摸索 | 第53-54页 |
| 3.5.3 SC124 5'调控区序列分析 | 第54-56页 |
| 3.5.4 KU50 5'调控区克隆序列 | 第56-57页 |
| 3.5.5 生物信息学分析SC124 5'调控区 | 第57-61页 |
| 3.5.6 生物信息学分析KU50 5'调控区 | 第61-66页 |
| 3.5.7 两个品种novel4 5'调控区序列比对 | 第66-67页 |
| 3.6 生理指标的结果分析 | 第67-71页 |
| 3.6.1 干旱胁迫对植物叶片钾含量的影响 | 第67-68页 |
| 3.6.2 干旱胁迫对钙离子含量的影响 | 第68-69页 |
| 3.6.3 内源激素ABA响应干旱胁迫 | 第69-70页 |
| 3.6.4 钾离子、钙离子和ABA含量相关性分析 | 第70-71页 |
| 4 讨论 | 第71-74页 |
| 4.1 本研究和前人研究的创新点 | 第71页 |
| 4.2 miRAN及靶mRNA的筛选 | 第71页 |
| 4.3 novel4在低温、干旱胁迫下表达的异同 | 第71-72页 |
| 4.4 novel4基因5'调控区的分析讨论 | 第72页 |
| 4.5 生理指标 | 第72-74页 |
| 5 结论 | 第74-75页 |
| 6 下一步试验计划 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-80页 |
| 致谢 | 第80页 |
