| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第1章 引言 | 第12-22页 |
| 1.1 染色质与核小体 | 第12-13页 |
| 1.2 核小体的定位 | 第13-14页 |
| 1.3 组蛋白及组蛋白修饰 | 第14-15页 |
| 1.4 组蛋白变构体影响核小体功能 | 第15-16页 |
| 1.5 调节染色质状态的主要机制 | 第16页 |
| 1.6 核小体排布的测定及预测 | 第16-17页 |
| 1.6.1 核小体排布的测定方法 | 第16-17页 |
| 1.6.2 核小体排布的预测 | 第17页 |
| 1.7 核小体在基因上排布的典型特征及作用 | 第17-18页 |
| 1.8 本课题研究的依据及意义 | 第18-22页 |
| 第2章 材料与方法 | 第22-52页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-30页 |
| 2.1.1 质粒 | 第22-23页 |
| 2.1.2 菌种 | 第23页 |
| 2.1.3 酶及化学试剂 | 第23-24页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第24-25页 |
| 2.1.5 培养基的配制 | 第25-27页 |
| 2.1.6 试剂的配制 | 第27-30页 |
| 2.1.7 抗体 | 第30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-52页 |
| 2.2.1 生物学软件分析 | 第30页 |
| 2.2.2 引物序列 | 第30-35页 |
| 2.2.3 酵母基因组DNA的抽提 | 第35-36页 |
| 2.2.4 在不额外引入酶切位点的前提下在LacZ基因不同位置插入内含子的方法 | 第36-37页 |
| 2.2.5 利用同源重组把目的片段插入BY4741酵母菌种中的实验策略 | 第37-38页 |
| 2.2.6 Touchdown PCR反应体系 | 第38页 |
| 2.2.7 PCR产物的检测 | 第38-39页 |
| 2.2.8 PCR产物纯化回收 | 第39页 |
| 2.2.9 酶切体系(NEB) | 第39-40页 |
| 2.2.10 酶切产物纯化回收 | 第40页 |
| 2.2.11 目的片段酶切产物与载体的酶连体系(TaKaRa) | 第40页 |
| 2.2.12 大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备和转化 | 第40-41页 |
| 2.2.13 菌落PCR验证转化结果 | 第41-42页 |
| 2.2.14 大肠杆菌质粒抽提及酶切验证 | 第42-43页 |
| 2.2.15 酵母电转化 | 第43-44页 |
| 2.2.16 LacZ(β-半乳糖苷酶)活性检测 | 第44-45页 |
| 2.2.17 酵母总RNA抽提 | 第45-46页 |
| 2.2.18 RNA变性电泳 | 第46页 |
| 2.2.19 RT-PCR | 第46-47页 |
| 2.2.20 Northern blot | 第47-48页 |
| 2.2.21 Western blot | 第48-52页 |
| 第3章 结果与分析 | 第52-79页 |
| 3.1 分析改变翻译起始位点附近核小体的排布对基因表达的影响 | 第52-62页 |
| 3.1.1 ADH1 promoter+LacZ/EGFP+ADH1 terminator in pRS413载体的克隆 | 第52-54页 |
| 3.1.2 ADH1 promoter+part of Cox4 intron+part of Ape2 intron+part ofLucifrase+LacZ/EGFP+3'terminator in pRS413载体的克隆 | 第54-57页 |
| 3.1.3 ADH1 promoter+part of Cox4 intron+part of Ape2 intron+LacZ/EGFP+3'terminator in pRS413载体的克隆 | 第57-58页 |
| 3.1.4 关于改变LacZ报告基因翻译起始位点附近核小体排布的克隆LacZ基因表达的检测结果 | 第58-61页 |
| 3.1.5 关于改变EGFP报告基因翻译起始位点核小体排布的克隆的荧光检测结果 | 第61-62页 |
| 3.2 通过在LacZ基因不同位置插入不同GC含量的内含子来研究剪切位点附近核小体排布的改变对内含子剪接及基因表达的影响 | 第62-70页 |
| 3.2.1 关于在LacZ报告基因不同位置插入酵母内含子的克隆结果 | 第62-65页 |
| 3.2.2 在LacZ报告基因不同位置插入酵母内含子克隆的LacZ表达情况分析 | 第65-69页 |
| 3.2.3 在LacZ报告基因不同位置插入酵母内含子克隆的内含子剪接情况分析 | 第69-70页 |
| 3.3 Gall promoter+LacZ+3'terminator in pRS413载体及其他相关载体的克隆 | 第70-73页 |
| 3.4 将部分LacZ报告基因插入酵母基因Met15中 | 第73-79页 |
| 3.4.1 METl5上游同源臂+kan marker+ADH1 promoter+LacZ+3'termi-nator+MET15下游同源臂in SK(-)载体的克隆 | 第73-77页 |
| 3.4.2 将LacZ报告基因插入酵母基因Met15中的酵母菌落PCR验证结果 | 第77-79页 |
| 第4章 讨论与展望 | 第79-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-87页 |
| 附录 | 第87-89页 |
